1、作為一種非線(xiàn)性的色譜技術(shù)，頂替色譜自問(wèn)世以來(lái)以分辨率高和處理量大而受到業(yè)界極大的關(guān)注。尋找廉價(jià)、易得的頂替劑一直是頂替色譜研究的重要方向。 本文通過(guò)對(duì)頂替色譜中蛋白質(zhì)頂替行為的分析提出了一種基于氨基酸的頂替劑構(gòu)建策略，并在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)了以氨基酸為延伸單元、賴(lài)氨酸為分支單元的樹(shù)枝狀頂替劑化學(xué)庫(kù)。通過(guò)引入了疏水性因子(IogP)作為頂替劑初步篩選的依據(jù)，本文對(duì)以苯丙氨酸出發(fā)構(gòu)建的樹(shù)枝狀頂替劑進(jìn)行了初步篩選。理論計(jì)算表明，在頂替劑分子

2、中引入側(cè)鏈含有苯環(huán)的氨基酸后，將導(dǎo)致頂替劑疏水性因子的明顯增大。由此，本文分別選擇了以苯丙氨酸、亮氨酸和甘氨酸為單體的樹(shù)枝狀頂替劑(Phe-D、Leu-D、Gly-D)，采用固相合成的方法進(jìn)行制備，并比較了它們的性能。采用固相合成技術(shù)合成的頂替劑的質(zhì)譜圖顯示該頂替劑分子量均勻且具有較高的純度。 本文采用空間質(zhì)量作用(SMA)模型研究了蛋白質(zhì)(細(xì)胞色素C和α-糜蛋白酶原A)和頂替劑的動(dòng)態(tài)親和性。首先，本文利用恒定洗脫實(shí)驗(yàn)和線(xiàn)性梯度

3、實(shí)驗(yàn)測(cè)得SMA線(xiàn)形參數(shù)，并利用非線(xiàn)形最小二乘法對(duì)利用靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)獲得的平衡數(shù)據(jù)規(guī)劃求解確定SMA非線(xiàn)形參數(shù)。進(jìn)而，利用SMA模型參數(shù)作出親和等級(jí)圖和動(dòng)力學(xué)親和圖來(lái)確定頂替色譜的操作條件并預(yù)測(cè)在頂替色譜過(guò)程中蛋白流出色譜柱的順序。 最后，本文采用靜態(tài)頂替實(shí)驗(yàn)研究了合成頂替劑的頂替性能并與BAEE頂替劑進(jìn)行了對(duì)比。靜態(tài)頂替實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，三種頂替劑對(duì)Cyt-C和Chy-A表現(xiàn)出了更高的頂替率，尤以Phe-D表現(xiàn)得最為顯著。這種頂替效果