1、目的：通過應用人臍帶間充質干細胞微囊干預膀胱腫瘤細胞（T24細胞），探討人臍帶間充質干細胞微囊對膀胱腫瘤細胞侵襲轉移過程中的作用，并探討其中可能影響到的信號通路。
　　方法：（1）征得參與者書面同意后，獲取人新鮮臍帶，無菌條件下提取剖宮產出生的健康足月新生兒的臍帶和胎盤，人臍帶間充質干細胞采用貼壁法進行原代培養(yǎng)，應用DMEM培養(yǎng)液（含10％胎牛血清）中培養(yǎng)，待細胞融合到80-90%時，1:3傳代。采用流式細胞儀檢測兩種細胞的表面標

2、志，通過檢測抗人CD14,CD31,CD34,CD44,CD45,CD73,CD90,CD105等對細胞進行鑒定，光鏡下觀察細胞形態(tài)，取第3-6代用于實驗。（2）分離、鑒定 hWJMSCs-MVs及蛋白定量分析，取第3-6代 hWJMSCs，采用無血清低糖 DMEM+0.25%BSA（牛血清蛋白）進行培養(yǎng)48h后，收集上清培養(yǎng)基。2000g離心30min去除細胞碎片。100,000g超速離心1h，棄上清，M199重懸，100,000g離

3、心1h，棄上清，M199200μl重懸備用。采用乳膠珠吸附 MVs后流式細胞技術鑒定其膜表面分子（CD9,CD34,CD44,CD45,CD63,CD73）。采用Bradford法進行 hWJMSC-MVs蛋白定量。采用透射電鏡負染法鑒定hWJMSC-MVs。（3）探索 hWJMSC-MVs對膀胱腫瘤細胞侵襲轉移的調控情況及信號通路分析：培養(yǎng) T24細胞12h后，分別加入100,μg/ml protein hWJMSC-MVs，繼續(xù)培養(yǎng)

4、48h。應用細胞劃痕實驗及Transwell小室法檢測腫瘤細胞侵襲轉移能力。Western Blot檢測E-cadherin，N-cadherin，Snail，MMP2，MMP9,β-catenin，ZEB1，Vimentin表達水平；（4）應用SPSS軟件進行數據分析。
　　結果：（1）采用組織塊貼壁法成功從人臍帶中分離出 hWJMSCs,經過1-3次傳代后 hWJMSCs呈貼壁生長，長梭形，形態(tài)均一，增殖旺盛。流式細胞技術鑒定

5、顯示hWJMSCs表達 CD44、 CD73、 CD90、 CD105，而不表達 CD14，CD31，CD34，CD45，這些特征符合國際細胞治療協會關于 MSCs的定義。（2）采用高速離心的方法成功地從 hWJMSCs上清液中分離出 MVs，并行透射電鏡及流式細胞技術檢測。MVs表面表達 CD9，CD44，CD63，CD73，而不表達血源性干細胞分子 CD34，CD45。（3）微囊處理結果：hWJMSC-MVs處理膀胱腫瘤 T24細胞

6、后，劃痕實驗及Transwell小室實驗表明實驗組膀胱腫瘤細胞侵襲轉移能力明顯降低，蛋白定量檢測結果表明，上皮間質轉化相關分子 E-cadherin表達升高，N-cadherin、Vimitin、Snail表達明顯降低（P<0.05）。
　　結論：（1）人臍帶間充質干細胞微囊能夠抑制膀胱腫瘤細胞的侵襲轉移能力；（2）人臍帶間充質干細胞微囊能夠抑制膀胱腫瘤細胞上皮轉化作用，從而影響 T24細胞的侵襲及轉移；（3）人臍帶間充質干細胞微