1、吸煙嚴重威脅人類健康，可導致動脈粥樣硬化性疾病的發(fā)生，而動脈粥樣硬化性疾病又是導致全球死亡的主要危險因素。吸煙使動脈粥樣硬化性疾病的發(fā)生率和病死率增高2-6倍。尼古丁(Nicotine)作為煙草中的主要毒性堿成分，被認為是引起心血管損害的主要物質。以往研究多集中在吸煙對血管內皮的直接損傷進而引發(fā)動脈粥樣硬化性疾病的發(fā)生，而血管周圍脂肪組織在內皮細胞損傷中所起到的作用尚未得到進一步研究。近年來，隨著對脂肪組織研究的深入，以及心血管疾病發(fā)病

2、率的急劇增加，血管周圍脂肪組織(Perivascular adipose tissue，PVAT)因與血管外膜間不存在任何解剖學屏障，逐漸成為學者們關注的重點。因此，本研究主要從尼古丁誘導的NF-κB通路和細胞凋亡水平，研究PVAT與血管內皮細胞之間的相關性。通過體外細胞培養(yǎng)，分析尼古丁刺激條件下內皮細胞、血管周圍脂肪細胞及內皮-脂肪細胞共培養(yǎng)后，NF-κB通路相關蛋白的變化情況，以及各細胞的凋亡情況，確定尼古丁對血管內皮細胞的促凋亡作

3、用和PVAT對其凋亡的調控作用及其作用機制。明確血管周圍脂肪組織在血管內皮損傷中的作用，及其在動脈粥樣硬化性疾病中的作用。
　　用10-6mol·L-1，10-7mol·L-1和10-8mol·L-1濃度的尼古丁分別處理內皮細胞和脂肪細胞，AnnexinⅤ-FITC檢測細胞凋亡。此外，本研究創(chuàng)新性的利用transwell培養(yǎng)板構建內皮細胞-脂肪細胞共培養(yǎng)體系，10-6mol·L-1的尼古丁處理內皮-脂肪細胞共培養(yǎng)體系后，同樣的方法

4、檢測共培養(yǎng)細胞凋亡。同時用qRT-PCR和western blot的方法分別檢測IKKβ、NF-κB p65和IkBα的基因和蛋白表達情況，并通過免疫熒光的方法檢測NF-κB p65的核轉移變化。
　　本研究結果表明，尼古丁對內皮細胞和脂肪細胞的促凋亡作用具有濃度依賴性，能夠作用于NF-κB信號通路來調節(jié)細胞凋亡。其中內皮細胞中10-6mol·L-1處理組細胞凋亡較對照組明顯增加(P＜0.01)。相比之下脂肪細胞對尼古丁的反應較為

5、敏感，不同作用濃度下其細胞凋亡較對照組均明顯增加(P＜0.05)。且無論是在基因還是蛋白水平，尼古丁處理后內皮細胞和脂肪細胞中IKKβ和NF-κB p65的表達量較對照組增加(P＜0.01;P＜0.05)。而共培養(yǎng)后的兩種細胞其細胞凋亡數(shù)目均較單純培養(yǎng)組明顯增加(P＜0.01;P＜0.05)。但IKKβ、NF-κB p65和IkBα的表達量的變化情況以共培養(yǎng)內皮細胞的變化為主。共培養(yǎng)內皮細胞中IKKβ、NF-κB p65的表達較單獨培養(yǎng)

6、內皮細胞明顯增加，IkBα明顯減少(P＜0.05)。同時，NF-κB p65的核轉移也較單獨培養(yǎng)內皮細胞明顯增加。此外，NF-κB信號通路抑制劑PDTC處理內皮細胞和脂肪細胞后細胞凋亡數(shù)目明顯減少(P＜0.05)。
　　一定濃度的尼古丁通過激活NF-κB信號通路，促進NF-κB的磷酸化，導致內皮細胞的過度凋亡和成熟脂肪細胞過度凋亡甚至壞死。且脂肪細胞經尼古丁染毒后能夠進一步激活內皮細胞中NF-κB信號通路，進而加重尼古丁對內皮細胞