1、器官移植是治療人類器官衰竭，挽救人類生命的有效方法。但器官移植供體嚴重短缺，遠遠不能滿足患者的需要。隨著科學研究的深入和科學技術的提高，異種器官移植逐漸成為醫(yī)學研究領域的熱點。小型豬的血液生理生化指標與人類接近，器官大小也接近于人，生長周期又短，因此小型豬可以作為制備特殊器官的生物反應器，成為異種器官移植供體來源的最佳提供者。隨著轉基因技術和誘導多能干細胞(iPS)研究的發(fā)展，利用人誘導多能干細胞進行人豬嵌合，在豬體內長出人的器官成為器

2、官移植供體可靠來源之一。
　　糖尿病和胰腺癌都有造成胰腺器官衰竭的可能，隨時都有生命危險，隨著我國經濟能力的提高和醫(yī)院移植技術的不斷完善，糖尿病和胰腺癌患者對胰腺移植的需求與日俱增，但胰腺移植也面臨同樣的問題，供體嚴重缺乏，配型困難。利用人豬嵌合技術，在胰腺缺陷的豬胚胎中注入患者的誘導多能性干細胞，讓豬體內長出病人的胰腺，不僅解決了糖尿病和胰腺癌患者胰腺移植供體不足的問題，同時也實現了個性化器官移植，減少免疫排斥。要實現這項生產胰

3、腺的偉大工程，首先我們要制備出胰腺缺陷的豬胚胎。
　　PDX1在胰腺生長發(fā)育過程中扮演重要角色，特異地表達于胰腺中;Notch信號通路對早期胰腺發(fā)育及胰腺細胞命運決定起到重要的調節(jié)作用，Hes1是Notch信號通路下游重要的調控轉錄效應因子，其基因編碼的蛋白主要負責轉錄抑制，通過轉錄抑制影響胚胎發(fā)育期的細胞增殖和分化。本研究以eGFP為報告基因，Hes1為目的基因，構建了胰腺特異性表達載體PDX1-eGFP和PDX1-Hes1。通

4、過體外轉染小鼠胰島β細胞試驗來驗證載體在體外的特異性表達，通過制備轉基因小鼠的試驗來驗證載體在體內的特異性表達情況以及對胰腺缺陷動物模型的制備進行相關探索，本研究為制備胰腺缺陷豬胚胎奠定基礎。主要試驗結果如下:
　　試驗一:胰腺特異性表達載體PDX1-eGFP和PDX1-Hes1的構建及體外驗證。成功構建了PDX1-eGFP和PDX1-Hes1這兩個載體。PDX1-eGFP轉染小鼠胰島β細胞和成纖維細胞48 h后，熒光顯微觀察結果

5、為在小鼠胰島β細胞中發(fā)光，而在非胰腺細胞的成纖維細胞中不發(fā)光，說明PDX1-eGFP的表達具有胰腺特異性轉染48 h，提取細胞蛋白，開始用Western Blot檢測。得到的結果是，小鼠胰島β細胞蛋白有eGFP表達，成纖維細胞蛋白無eGFP表達，同樣說明PDX1-eGFP的表達具有胰腺特異性。PDX1-Hes1和空載體分別轉染小鼠胰島β細胞48 h后，提取RNA和蛋白，經實時熒光定量PCR實驗和Western Blot分析，結果均顯示，

6、Hes1在轉PDX1-Hes1的小鼠胰島β細胞中的表達量顯著高于轉空載體的小鼠胰島β細胞，這說明PDX1-Hes1可以使Hes1基因在胰腺細胞中特異性過表達。
　　試驗二:PDX1-eGFP和PDX1-Hes1在小鼠體內的表達研究。通過轉基因小鼠的制備，成功獲得了1只PDX1-eGFP小鼠和2只PDX1-Hes1小鼠。PDX1-eGFP小鼠通過RT-PCR實驗和Western Blot分析，結果均表明，eGFP在PDX1-eGFP

7、小鼠的胰腺中表達，而在PDX1-eGFP小鼠的肝中與對照小鼠的胰腺和肝臟中均不表達;更有說服力的一個結果是，通過活體熒光觀察，PDX1-eGFP小鼠僅胰腺部位有明顯綠色熒光，而PDX1-eGFP小鼠的其他部位和對照小鼠的全身均無綠色熒光。這說明eGFP在PDX1啟動子的啟動下在小鼠體內的胰腺中特異性表達。PDX1-Hes1小鼠通過RT-PCR實驗和實時熒光定量PCR實驗，結果均顯示，Hes1在PDX1-Hes1小鼠胰腺中的表達明顯高于對