1、目的:克隆一種新的分泌蛋白基因,對其生物學特性進行研究,為開發(fā)具有中國自主知識產(chǎn)權的有功能意義的新藥奠定基礎.方法:該研究應用生物信息學,尋找到一種新的分泌蛋白基因NSP019.通過引物設計,用PCR方法,從人腦垂體cDNA庫中克隆到此基因,在與載體連接后,經(jīng)核酸測序再分別導入原核和真核細胞進行表達,運用Western blot、Northern blot及亞細胞定位等方法,對克隆到的一種新的分泌蛋白基因NSP019及其表達產(chǎn)物進行研究

2、.結果:生物信息學分析顯示,NSP019基因含5716個堿基,開放閱讀框架為726個堿基,翻譯成共241個氨基酸的蛋白質(zhì),預計分子量約為27KD.通過SignalP、ScanProsite、CD-Search等軟件分析,發(fā)現(xiàn)NSP019蛋白N-端有一段長度為32個氨基酸的疏水信號肽,并且含有一個谷胺酰胺富集區(qū).定位在第二號染色體上,含有五個外顯子.我們的實驗結果顯示,NSP019基因ORF為726bp,編碼241個氨基酸,與生物信息學預

3、測相符.Western blot及亞細胞定位證明NSP019基因編碼的產(chǎn)物為一種分泌蛋白,Northern blot顯示其在人體多組織均見表達.NSP019基因在原核系統(tǒng)中亦能表達,主要形成包涵體.通過GST系統(tǒng)我們得到了NSP019的純化蛋白.結論:該研究證實我們所克隆的NSP019是一個新的具有分泌性的蛋白基因(GenBank的登錄號:Accession NO.AF361495).NSP019蛋白與細胞發(fā)育、胞內(nèi)蛋白的調(diào)控有關,可能