1、生物藥物是一類采用現代生物技術而得到的用于預防、治療和診斷的藥物。因其具有藥理活性高、毒副作用小、營養(yǎng)價值高、治療針對性強的特點而成為21世紀最有發(fā)展?jié)摿Φ男屡d藥物。因此國內外醫(yī)藥學領域高度重視生物藥物的研發(fā)和制備，而對其分析鑒定和檢測則是將其推廣至臨床應用的基礎。
　　p53基因是一個重要的抑癌基因，它編碼的p53蛋白在識別和修復DNA損傷、抑制細胞惡性增殖、促進細胞凋亡和誘導細胞周期阻滯方面發(fā)揮重要作用。野生型p53基因的缺失

2、會導致腫瘤的發(fā)生，然后細胞出現生長、凋亡和DNA修復功能的紊亂。據報道稱，25％-35％的癌性神經細胞和70％-76％的膠質瘤細胞會出現p53基因的突變，所以恢復細胞中的p53蛋白功能被認為是神經腫瘤治療的一種方法。由于p53蛋白的制備、檢測及功能分析是其用于腫瘤治療的基礎，常規(guī)的檢測方法如ELISA、Western blot等只能對p53蛋白進行定性和定量分析，不能保證其生物活性，因此需要既能保證蛋白準確性又能檢測其功能的方法來分析檢

3、測p53。
　　p53蛋白細胞滲透性較低，僅靠自身難以穿過細胞膜進入神經腫瘤細胞，這使得p53蛋白的應用受到了一定限制。因此可考慮p53蛋白與具有穿膜效應的多肽結合來提高p53蛋白的轉運效率。實驗組前期發(fā)現一個新型衍生肽，命名為RDP（RVG-derived peptides），它的部分序列來源于狂犬病毒糖蛋白(RVG)嗜神經性的關鍵片段。實驗發(fā)現其能攜帶BDNF蛋白及基因快速特異性地進入腦內并發(fā)揮功能，因此考慮將RDP與p53蛋

4、白通過化學鍵連接，確定其分析方法并檢測p53蛋白在細胞內的生物學功能，從而希望為抑制神經系統(tǒng)腫瘤，如惡性腦膠質瘤的生長增殖提供一種新的方法。
　　第一部分:利用基因工程技術構建重組質粒pET28a-p53，將p53基因連接到pET28a中。優(yōu)化了p53蛋白的制備條件，SDS-PAGE分析了p53蛋白的準確性，Folin-酚法對p53蛋白的含量進行測定，然后分別制備并純化了靶向性p53融合蛋白和p53蛋白。
　　第二部分:分別

5、合成了熒光染料FITC和羅丹明B異硫氰酸酯(Rho B)標記的靶向性p53融合蛋白和p53蛋白，并采用熒光分光光度法分析了該蛋白的熒光強度，然后通過細胞實驗和小動物活體成像分析檢測了靶向性p53蛋白的細胞選擇性和入腦可行性。
　　第三部分:對靶向性p53融合蛋白的功能進行分析。通過MTT法檢測靶向性p53融合蛋白的生物活性，并采用凋亡與壞死檢測、流式細胞儀來探究靶向性p53融合蛋白的作用機制。實驗結果表明靶向性p53融合蛋白不僅對