1、[目的與背景]肺癌是全球范圍內(nèi)第一大的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率均很高，并呈現(xiàn)不斷上升的趨勢。肺癌早期確診率低，預(yù)后差，按照組織學(xué)分類，肺癌可以分非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(SCLC)，在所有確診的肺癌病例中，NSCLC大約占85％。NSCLC是一種惡性程度極高，發(fā)生、發(fā)展快，且易發(fā)生轉(zhuǎn)移的惡性腫瘤。細(xì)胞角蛋白14(cytokeratin-14，CK14)是一種分化特異的蛋白質(zhì)，屬于酸性細(xì)胞角蛋白家族。CK14的表達(dá)僅限于各

2、種來源的肌上皮和角化復(fù)層上皮的基底細(xì)胞，是組成細(xì)胞骨架的蛋白質(zhì)之一。已有研究表明，CK14在肺鱗癌、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌等惡性腫瘤中高表達(dá)，此外有研究表明CK14的高表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌和宮頸癌變過程、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)。脾酪氨酸激酶(spleentyrosine kinase，Syk)作為酪氨酸激酶家族的成員之一，被發(fā)現(xiàn)在造血細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、乳腺上皮細(xì)胞、胰腺上皮細(xì)胞及鼻成纖維細(xì)胞中均有廣泛表達(dá)。更進(jìn)一步的研究表明，其表達(dá)降低或缺失同多種

3、惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)。Coopman等于2000年首次發(fā)現(xiàn)并報道了Syk在乳腺癌中的表達(dá)情況，提出Syk具有抑制乳腺癌發(fā)生的作用。其后的研究發(fā)現(xiàn)，Syk在食管癌、胃癌、肺癌、胰腺癌等腫瘤組織中低表達(dá)，并且腫瘤的侵襲性越強表達(dá)率越低。盡管CK14與Syk各自在NSCLC中研究已經(jīng)較為廣泛，并且已經(jīng)取得了相應(yīng)的研究成果，但是兩者同時在NSCLC中的研究還未見報道，我們希望通過同時檢測并分析CK14與Syk在NSCLC患者癌組織、癌

4、旁組織和正常肺組織中的表達(dá)，初步探討二者的表達(dá)與NSCLC由正常肺組織到癌旁組織、癌組織整個癌變過程中的相關(guān)性;并進(jìn)一步研究CK14與NSCLC患者各臨床病理參數(shù)的關(guān)系，來探討CK14的表達(dá)與NSCLC發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的關(guān)系，以及在診療和預(yù)后評估中的意義。
　　[材料與方法]1.收集自2008年1月至2015年12月于山東大學(xué)第二醫(yī)院胸外科行手術(shù)治療臨床病理資料完整的原發(fā)性NSCLC患者110例，標(biāo)本嚴(yán)格按照取材要求選取癌組織、癌

5、旁組織和正常肺組織，常規(guī)石蠟包埋、切片，采用免疫組織化學(xué)染色法（Immunohistochemistry，IHC）檢測110例NSCLC患者各組織中CK14與Syk的表達(dá)，并采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法，分析從正常肺組織到癌旁組織、肺癌組織整個癌變過程中CK14的表達(dá)情況及意義，研究CK14與Syk表達(dá)的相關(guān)性，進(jìn)一步探討CK14的表達(dá)與NSCLC患者性別、年齡、組織類型、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的關(guān)系及其與Syk表達(dá)有無顯著統(tǒng)計學(xué)差

6、異。2.選取12例NSCLC患者肺癌組織、癌旁組織、正常肺組織的新鮮標(biāo)本，常規(guī)方法提取蛋白，BCA法測定樣品中蛋白的濃度，煮沸變性。采用Western blotting法檢測CK14的表達(dá)情況，探討CK14在肺癌組織、癌旁組織、正常肺組織的新鮮標(biāo)本是否有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。
　　[實驗結(jié)果]1.在肺鱗癌、肺腺癌中CK14呈陽性表達(dá)，而正常肺組織中CK14呈低表達(dá)或陰性表達(dá)。在肺鱗癌、肺腺癌中Syk呈低表達(dá)或陰性表達(dá)，而在正常肺組織中S

7、yk呈陽性表達(dá)。CK14在肺癌組織中的陽性表達(dá)率較癌旁組織和正常肺組織中高，在NSCLC肺癌組織、癌旁組織及正常肺組織中的陽性表達(dá)率分別為68.18％(75/110)、4.55％(5/110)、0％(0/110)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)，CK14在癌旁組織和正常肺組織中表達(dá)的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。Syk在肺癌組織中的陽性表達(dá)率較癌旁組織和正常肺組織低，在在NSCLC肺癌組織、癌旁組織及正常肺組織中的陽性表達(dá)率

8、分別為5.45％(6/110)、95.45％(105/110)、100％(110/110)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)，癌旁組織和正常肺組織中Syk表達(dá)率的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。2.CK14的表達(dá)與NSCLC患者的性別、組織類型、分化程度、分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān)。男性患者CK14表達(dá)率高于女性患者，鱗癌CK14表達(dá)率高于腺癌，分化程度越低CK14表達(dá)率越高，分期越晚CK14表達(dá)率越高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的CK14

9、表達(dá)率更高(P＜0.05);CK14的表達(dá)與NSCLC患者的年齡無關(guān)(P＞0.05)。3.在肺癌組織中， CK14與Syk的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.35，P＜0.001）;在癌旁組織中，CK14與Syk的表達(dá)無相關(guān)性（P=0.66，r=0.04）。4.Western blotting結(jié)果顯示，CK14蛋白在NSCLC癌組織中的表達(dá)較癌旁組織和正常肺組織高，在癌旁組織和正常肺組織中的表達(dá)無明顯差異。5.以是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為因變量，將患者

10、性別、年齡、組織類型、分化程度、分期、CK14表達(dá)引入非條件Logistic模型，結(jié)果示低分化癌、病理分期Ⅱ期和Ⅲ期、CK14表達(dá)陽性是NSCLC患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要危險因素(P＜0.05)。
　　[實驗結(jié)論]1.CK14的表達(dá)與NSCLC患者的年齡、組織類型、分化程度、分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān)，說明CK14的表達(dá)與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)。
　　2.NSCLC癌組織中CK14表達(dá)顯著增高，Syk表達(dá)顯著