1、目的：⑴探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（rat bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSCS)體外分離純化擴(kuò)增培養(yǎng)的方法以及慢病毒載體介導(dǎo)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein,eGFP)對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記的理想條件；⑵觀察移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在肝臟纖維化模型鼠肝內(nèi)的分布,遷移和分化狀況，并從病理以及血清學(xué)水平評(píng)價(jià)移植細(xì)胞對(duì)肝臟纖維化模型大鼠的治療效果，為臨床

2、自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療肝臟疾病提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　方法：①利用密度梯度離心結(jié)合貼壁生長(zhǎng)的方法體外分離、培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)對(duì)其表面抗原進(jìn)行鑒定，并用eGFP對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記；②四氯化碳腹腔注射構(gòu)建SD大鼠肝臟纖維化模型；以eGFP標(biāo)記的正常SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為細(xì)胞來(lái)源，通過(guò)尾靜脈注射將標(biāo)記的細(xì)胞移植入肝臟纖維化模型大鼠體內(nèi)，對(duì)照組注射生理鹽水。③細(xì)胞移植后取大鼠肝臟做組織病理學(xué)檢查：冰凍切片在熒光

3、顯微鏡下觀察eGFP陽(yáng)性細(xì)胞在肝內(nèi)的分布狀況；石蠟切片行GFP/ALB免疫熒光雙染檢測(cè)歸巢細(xì)胞在肝內(nèi)的分化；免疫組化檢測(cè)α-SMA在肝內(nèi)的表達(dá)狀況；⑷同時(shí)采集大鼠血液，以全自動(dòng)生化分析儀和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)肝功能指標(biāo)和血清纖維化指標(biāo)。
　　結(jié)果：⑴體外分離獲得了高純度貼壁生長(zhǎng)的大鼠BMSCs，流式細(xì)胞儀鑒定結(jié)果顯示細(xì)胞高表達(dá)CD44、CD90，而CD34、CD45表達(dá)陰性；并用攜帶eGFP報(bào)告基因的慢病毒成功對(duì)其進(jìn)行感染，感染率達(dá)80

4、％以上。⑵腹腔注射CCL410周后成功構(gòu)建SD大鼠肝臟纖維化模型。⑶BMSCs移植大鼠肝臟中可檢測(cè)到eGFP陽(yáng)性的細(xì)胞，主要沿著中央靜脈及匯管區(qū)周圍纖維間隔分布，并逐漸向肝組織內(nèi)部遷移。免疫組化結(jié)果顯示eGFP陽(yáng)性細(xì)胞呈肝細(xì)胞樣細(xì)胞形態(tài)，且與肝組織相容。免疫熒光雙染法檢測(cè)到部分eGFP陽(yáng)性細(xì)胞同時(shí)表達(dá)白蛋白（ALB）。α-SMA在肝組織的表達(dá)明顯減少。⑷BMSCs移植組與模型對(duì)照組和生理鹽水組相比，肝功能和血清纖維化指標(biāo)好轉(zhuǎn)，差異具有統(tǒng)