大彈涂魚(yú)遺傳多樣性及其與彈涂魚(yú)遺傳標(biāo)記RAPD的研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、本文以2002年3月和2002年9月采自浙江寧海三門(mén)灣海區(qū)的大彈涂魚(yú)(Boleophthalmus pectinirostris L.)和彈涂魚(yú)(Periophthalmus cantonensis O.)為材料,對(duì)大彈涂魚(yú)的遺傳多樣性及其與彈涂魚(yú)的遺傳標(biāo)記進(jìn)行了RAPD研究。 基因組DNA提取方法:應(yīng)用上海生物工程公司的UNIQ-10柱式基因組DNA抽提試劑盒能快速簡(jiǎn)便(15分鐘內(nèi),除去樣品準(zhǔn)備時(shí)間)獲得高質(zhì)量的基因組DNA,

2、其長(zhǎng)度在21kb左右,A260nm/A280nm比值在1.82~1.93之間,DNA濃度為173.7356μg/ml。彈涂魚(yú)的RAPD—PCR擴(kuò)增的適宜反應(yīng)條件:擴(kuò)增反應(yīng)總體積25μl;其中包括DNA 25ng,dNTP 0.1mmol/L,引物濃度0.4μmol/L,鎂離子的濃度1.5mmol/L,1.0U Taq DNA聚合酶。擴(kuò)增程序?yàn)?4℃預(yù)變性5min,94℃變性1min,36℃退火1min,72℃延伸2min,共40個(gè)循環(huán),

3、最后一個(gè)循環(huán)結(jié)束后,72℃延伸10min,4℃保溫。 大彈涂魚(yú)遺傳多樣性RAPD研究結(jié)果:20個(gè)引物共擴(kuò)增出100個(gè)DNA片段,多態(tài)位點(diǎn)比例為21﹪,任意兩個(gè)個(gè)體間遺傳相似度最大為0.9938,最小為0.9239,平均為0.9645。任意兩個(gè)個(gè)體間的遺傳距離最大為0.0761,最小為0.0062,絕大多數(shù)為0.0200-0.0500;大彈涂魚(yú)野生群體的平均雜合度為0.2018,遺傳距離平均值為0.0355;Shannon多樣性指

4、數(shù)和Shannon多樣性值分別為5.918和0.0592。 大彈涂魚(yú)和彈涂魚(yú)RAPD標(biāo)記研究結(jié)果:21個(gè)引物,共擴(kuò)增出124條帶,兩種彈涂魚(yú)共有條帶數(shù)為13條;大彈涂魚(yú)擴(kuò)增出了73條特異性譜帶,彈涂魚(yú)擴(kuò)增出了64條特異性譜帶。大彈涂魚(yú)和彈涂魚(yú)種群內(nèi)平均帶紋頻率分別為0.9452和0.9809,相應(yīng)的遺傳變異度則為0.0548和0.0191。大彈涂魚(yú)的ABS(平均帶紋相似系數(shù))為0.9893,彈涂魚(yú)的ABS為0.9947,大彈涂魚(yú)

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