1、第一部分：臍帶間充質干細胞分化為神經細胞并修復脊髓損傷的研究
　　目的：脊髓損傷（spinal cord injury, SCI）是由外傷誘發(fā)的一種脊柱外科創(chuàng)傷性疾病，表現(xiàn)為在損傷節(jié)段以下出現(xiàn)感覺、運動和自主神經功能障礙。國外流行病學調查顯示，每年全球有13萬新發(fā)脊髓損傷患者，且有超過250萬患者正飽受著不同程度的脊髓損傷后遺癥困擾，而這些SCI患者每年的醫(yī)療支出將超過60億美元，給家庭及社會造成沉重負擔。
　　目前臨床上用

2、于治療SCI的方法主要局限在藥物、手術及各種物理干預，SCI的干細胞治療仍停留在動物相關的基礎研究層面，如骨髓基質干細胞移植、嗅鞘細胞移植、臍帶血間充質干細胞移植、臍帶華通膠來源間充質干細胞（mesenchymal stem cells, MSCs）移植、NogoA疫苗移植等。由于臍帶間充質干細胞具有來源廣泛、易擴增、無倫理學方面的限制，已成為基礎實驗中用于治療脊髓損傷的新熱點和新方向。臍帶血間充質干細胞在特定的環(huán)境誘導下可以分化為具有

3、不同功能的組織細胞，并促進保護性因子的產生，且具有整合、調節(jié)、遷移和分泌等作用。當分化為神經細胞后可以促進神經組織的修復，改善脊髓損傷大鼠的神經功能。國內有學者采用移植人臍帶血干細胞的方法來治療大鼠脊髓損傷，雖獲得了滿意的療效，但存在干細胞分化效率較低等問題。本研究旨在提高臍帶間充質干細胞體外誘導分化為神經細胞的效率，并將其移植到脊髓損傷小鼠動物模型，為脊髓損傷這一難治性疾病提供了理論基礎。
　　方法：采集人臍帶并采用植塊法、膠原

4、酶消化法及膠原酶與胰酶聯(lián)合消化法分離人臍帶間充質干細胞（Human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs），培養(yǎng)、擴增后，將Nurr-1轉染到臍帶間充質干細胞，并聯(lián)合雞尾酒因子（ATRA, GGF-2, bFGF, PDGF and forskolin）將臍帶間充質干細胞誘導分化為神經細胞，利用免疫熒光技術檢測神經細胞標志物表達情況。取昆明系小白鼠進行脊髓損傷模型的建立，并將分化后

5、的細胞移植到脊髓損傷小鼠體內，免疫組化檢測細胞移植后的定植情況，判斷其治療效果。
　　結果：人臍帶間充質干細胞經過誘導后，細胞開始收縮變圓，進而變得拉伸后成為多角樣，在持續(xù)增長的過程中，細胞的胞體開始拉絲樣出現(xiàn)神經細胞的突觸樣結構。誘導2周后，借助免疫熒光檢測法可以檢測出神經細胞特有標志物MAP-2和MBP存在，且經Nurr-1過表達的臍帶間充質干細胞分化為神經細胞的效率最高。造模小鼠的脊髓損傷段結構遭到破壞，灰質內出現(xiàn)較多的神經

6、元死亡，前角部分神經元尚存，其中部分神經元可見核固縮。hUCMSCs移植后細胞在損傷部位大量增殖，熒光顯微鏡下可檢測到抗人細胞核陽性細胞，術后小鼠BBB評分逐漸提高，后肢運動功能逐漸改善。
　　結論：經Nurr-1基因轉染的臍帶間充質干細胞在雞尾酒因子的誘導下可以獲得最好的分化及增殖，移植到受傷脊髓處可以在損傷部位增殖，同時小鼠的后肢功能獲得明顯改善，表明治療脊髓損傷療效確切。
　　第二部分：無骨折脫位型脊髓損傷手術與非手術

7、治療的臨床療效對比研究
　　目的：無骨折脫位型脊髓損傷（cervical spinal cord injury without fracture or dislocation, CSCIWFD）是一類特殊類型的脊髓損傷，臨床較多間，通常指頸部受到“較輕微”外力損傷后經過影像學檢查，如X線、CT掃描等均未發(fā)現(xiàn)明顯的頸椎骨折或脫位，但脊髓損傷癥狀相對較重的一類骨科疾病，大約占到頸脊髓損傷總數(shù)的23％。查閱文獻發(fā)現(xiàn)，CSCIWFD的治療

8、方法主要分為兩種，一種是采用大劑量糖皮質激素沖擊、神經營養(yǎng)藥物靜點及高壓氧治療的保守治療（非手術治療），另一類是積極采用外科手段對脊髓進行充分減壓的手術治療。每種治療方法都可以促使CSCIWFD患者獲得一定程度的神經功能恢復，但手術干預作為一種有創(chuàng)性操作，其總體療效是否優(yōu)于非手術治療呢？針對此問題，我們進行了較深入的臨床對比研究。
　　方法：回顧性分析2013年10月～2015年9月在門診就診和住院治療的110例CSCIWFD患者

9、的臨床資料，其中92例獲得了超過18個月的臨床隨訪，根據(jù)患者所接受的治療方法分為兩組：A組（非手術組），38例，其中男23例，女15例，年齡19～63歲，平均42.1歲，均接受非手術治療；B組（手術組），54例，其中男35例，女19例，年齡17～62歲，平均40.8歲，均接受手術治療。記錄手術治療組患者的手術時間、術中出血量及并發(fā)癥發(fā)生情況；兩組分別在治療前、治療后1周、治療后1個月及末次隨訪時采用日本骨科協(xié)會（Japanese Ort

10、hopaedic Association, JOA）脊髓損害評分表（17分法）評估治療效果；末次隨訪時根據(jù)ASIA脊髓損傷分級標準對兩組患者進行比較分析。
　　結果：B組所有患者均順利接受手術，其中10例患者接受頸前路椎間盤切除植骨內固定術，17例患者接受頸前路椎體次全切除內固定術，16例患者接受頸后路單開門椎管擴大成形鈦板固定術，11例患者接受頸后路全椎板減壓側塊螺釘固定術。平均手術時間175.2 min，平均出血量為210.6

11、 ml。A組JOA評分由治療前的7.0±1.8分提高至術后1周時的7.9±2.0分、1個月時的9.1±2.2分、3個月時的9.9±2.3分、6個月時的10.5±2.4分和末次隨訪時的11.2±2.9分，治療前后比較差異具有顯著性（P<0.05），神經功能改善率為41.3%±9.6%；B組JOA評分由術前的6.7±1.6分提高至術后1周時的8.9±2.2分、1個月時的10.6±2.5分、3個月時的12.0±2.8分、6個月時的13.9±3

12、.1分和末次隨訪時的14.5±3.6分，手術前后比較具有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.05），神經功能改善率為70.2%±10.3%。末次隨訪時根據(jù)ASIA分級：A組獲A級3例，B級7例， C級10例，D級14例，E級4例；B組獲A級3例，B級6例，C級16例，D級17例，E級12例，兩組與治療前比較均具有顯著性差異（P<0.05）。A組發(fā)生消化道出血1例，肺部感染2例，褥瘡2例，下肢深靜脈血栓1例；B組發(fā)生傷口感染1例，硬膜外血腫2例，褥瘡

13、1例，硬膜撕裂導致腦脊液漏1例，兩組并發(fā)癥發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　結論：與非手術方法相比，脊髓減壓內固定術可更快、更好的促進無骨折脫位型脊髓損傷患者神經功能的恢復，且手術治療不會增加圍手術期并發(fā)癥的發(fā)生率。
　　第三部分：前、后路減壓內固定術治療無骨折脫位型脊髓損傷療效對比分析
　　目的：目前國內外文獻通過不同方法和側面比較均已證實無骨折脫位型脊髓損傷（CSCIWFD）手術治療效果要明顯優(yōu)于各

14、種非手術療法。因此，臨床上一旦遇到CSCIWFD患者出現(xiàn)不同程度的神經功能受損時，就需要采取積極的、合適的手術入路及減壓方法來重建或恢復椎管的通暢性。
　　用于治療CSCIWFD的手術方法很多，常見的有頸椎前路椎間盤摘除植骨內固定術、頸前路椎體次全切除植骨內固定術、頸后路單開門椎管擴大成形內固定術、頸后路全椎板減壓側塊螺釘內固定術等。根據(jù)手術入路劃分，上述術式可分為經前路和后路脊髓減壓術，那么前、后路手術在總體療效上是否存在差異呢

15、，本研究針對這一問題進行了分組比較。
　　方法：回顧性分析2013年09月～2015年12月在我院接受手術治療的82例CSCIWFD患者的臨床資料，根據(jù)患者接受的是前路減壓還是后路減壓將其分為兩組：A組（前路組），45例，其中男26例，女19例，年齡22～62歲，平均41.6歲，均接受頸前路減壓內固定術治療；B組（后路組），37例，其中男24例，女13例，年齡19～64歲，平均42.9歲，均接受頸后路減壓內固定術治療。分別記錄兩組

16、患者的手術時間、術中出血量及并發(fā)癥發(fā)生情況；術前及隨訪過程中以日本骨科協(xié)會（Japanese Orthopaedic Association, JOA）脊髓損害評分表（17分法）評估治療效果；末次隨訪時根據(jù)ASIA脊髓損傷分級標準對兩組患者神經功能恢復恢復情況進行比較分析。
　　結果：兩組患者均順利接受手術，A組平均手術時間（62.6±13.7） min，平均出血量（105.1±16.3）ml；B組手術時間（117.9±22.6）

17、 min，術中出血量（240.8±46.3）ml，組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。A組JOA評分由治療前的6.8±1.5分提高至術后2周時9.5±1.9分、3個月時的11.6±2.6分及末次隨訪時的13.5±3.1分，治療前后比較差異具有顯著性（P<0.05），神經功能改善率為65.6%±8.3%，手術前后比較差異具有顯著性（P<0.05）；B組JOA評分由術前的6.6±1.4分提高至術后2周時8.6±1.7分、術后3個月時

18、的10.9±2.5分及末次隨訪時的13.3±3.4分，手術前后比較具有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.05），神經功能改善率為64.5%±8.5%。術后2周時兩組JOA評分比較具有顯著性差異（P<0.05）。但術后3個月及末次隨訪時兩組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。末次隨訪時根據(jù)ASIA分級：A組獲A級1例，B級6例，C級11例，D級18例，E級9例；B組獲A級1例，B級4例，C級11例，D級13例，E級8例，與治療前比較均具有顯著性

19、差異（P<0.05），術后組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。A組發(fā)生腦脊液漏2例，喉返神經牽拉損傷1例；鈦網下沉1例；B組發(fā)生傷口感染1例，液化壞死1例，硬膜外血腫2例，兩組并發(fā)癥發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　結論：經前路和后路脊髓減壓內固定術均可以有效促進患者神經功能的恢復，圍手術期并發(fā)癥的發(fā)生率基本相同，但頸前路手術創(chuàng)傷小，手術時間短，術中出血少，術前應根據(jù)患者脊髓受壓節(jié)段、壓迫源及髓內信號長度來進