1、卵母細胞在體內(nèi)的發(fā)育是個極其復雜的過程。到目前為止，對于綿羊卵母細胞成熟調(diào)節(jié)的機制尚未完全清楚，從而制約了綿羊卵母細胞體外成熟培養(yǎng)質(zhì)量的進一步提高。本研究通過對綿羊有腔卵泡中的卵母細胞及其在體外成熟過程中細胞核核相及皮質(zhì)顆粒的分布特征進行研究，探索了綿羊卵母細胞細胞核成熟、細胞質(zhì)成熟的變化規(guī)律。
　　用地衣紅染色方法觀察綿羊早期有腔卵泡（1 mm≤直徑≤2.5 mm）與中期有腔卵泡(2.5 mm＜直徑≤7.5 mm)中卵母細胞的核

2、相特征，用FITC-PNA、Hoechst33342雙染方法觀察兩組綿羊卵泡中處于不同核相時期的卵母細胞的皮質(zhì)顆粒分布特征，結(jié)果表明:成年綿羊早期和中期有腔卵泡中的絕大部分卵母細胞處于GⅤ期的不同階段，中期有腔卵泡中卵母細胞的核成熟進程比早期有腔卵泡中卵母細胞的核成熟進程靠后;早期有腔卵泡與中期有腔卵泡中卵母細胞的皮質(zhì)顆粒分布類型相同，且各類型所占比例無顯著性差異(P＞0.05)。
　　用FITC-PNA、Hoechst33342

3、雙染方法研究不同直徑綿羊卵泡內(nèi)卵母細胞以及體外成熟過程中綿羊卵母細胞的核相及皮質(zhì)顆粒分布特點，結(jié)果表明:隨著綿羊卵母細胞核成熟進程的發(fā)展，其皮質(zhì)顆粒的分布與遷移也發(fā)生了規(guī)律性的變化，按照其發(fā)生特點及概率可劃分為五種類型，即均勻分布、空洞式分布、周邊式分布、雙層分布、環(huán)狀分布（其中羔羊卵母細胞并未發(fā)現(xiàn)明顯的雙層分布方式）;皮質(zhì)顆粒的遷移方式為由卵母細胞胞質(zhì)中央的皮質(zhì)顆粒先向卵母細胞近皮質(zhì)處遷移，近皮質(zhì)處的皮質(zhì)顆粒再逐漸向細胞膜下遷移形成雙

4、層分布，最后近皮質(zhì)處的皮質(zhì)顆粒遷移完畢，在細胞膜下形成一個環(huán)狀結(jié)構(gòu)。
　　測定成年綿羊和羔羊卵母細胞體外成熟0h、8h、12h、16h、24 h的核相及皮質(zhì)顆粒分布情況，結(jié)果顯示:(1)無論是成年綿羊還是羔羊，其卵母細胞在體外成熟的5個時間點所對應(yīng)的特征性核相分別是GⅤ期、GⅤBD期、MⅠ期、AⅠ～TⅠ期、MⅡ期核相，其百分比均超過50％以上，其中成年綿羊卵母細胞在ⅣM24 h的MⅡ期比例為73.2％，羔羊為59.4％，兩者差異顯

5、著(P＜0.05);(2)隨著卵母細胞體外成熟時間的延長，成年綿羊卵母細胞的前三種皮質(zhì)顆粒分布比例逐漸下降，而后兩種皮質(zhì)顆粒的分布比例逐漸上升。羔羊卵母細胞的前兩種皮質(zhì)顆粒的分布比例逐漸下降，而后兩種皮質(zhì)顆粒的分布比例逐漸上升，但羔羊卵母細胞在ⅣM12 h、16 h、24 h時，皮質(zhì)顆粒的均勻分布比例之間差異不顯著(P＞0.05)。另外，成年綿羊卵母細胞在ⅣM24 h時，皮質(zhì)顆粒呈環(huán)狀分布的比例達到了47％，而羔羊卵母細胞只達到了25.

6、7％，兩者之間差異顯著(P＜0.05);(3)隨著卵母細胞減數(shù)分裂成熟進程的發(fā)展，成年綿羊卵母細胞的前三種皮質(zhì)顆粒分布比例逐漸下降，而后兩種皮質(zhì)顆粒的分布比例逐漸上升。羔羊卵母細胞的前兩種皮質(zhì)顆粒的分布比例逐漸下降，而后兩種皮質(zhì)顆粒的分布比例逐漸上升，但羔羊卵母細胞中皮質(zhì)顆粒呈均勻分布的比例在各減數(shù)分裂階段均較高，即由GⅤ期～MⅠ期，羔羊卵母細胞中皮質(zhì)顆粒呈均勻分布的比例均顯著高于同時期其他皮質(zhì)顆粒分布類型比例(P＜0.05)。另外，無

7、論是成年綿羊還是羔羊，皮質(zhì)顆粒呈環(huán)狀分布的卵母細胞比例均在MⅡ期時達到最高，其比例分別為56.8％和44％，顯著高于同時期其它類型比例(P＜0.05)，且顯著高于其它時期皮質(zhì)顆粒呈環(huán)狀分布的卵母細胞比例(P＜0.05)，兩比例之間差異顯著(P＜0.05)?？梢?，在體外成熟過程中，大部分綿羊卵母細胞隨著細胞核的成熟，其皮質(zhì)顆粒的遷移程度逐漸增大，有些卵母細胞的皮質(zhì)顆粒遷移速度相對滯后或在不同的減數(shù)分裂階段中發(fā)生停滯。相比較羔羊卵母細胞，成