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文檔簡介
1、水稻條紋病毒(Ricestripevirus,RSV)引起的水稻條紋葉枯病是東亞水稻的重要重要病害之一,由介體灰飛虱(Laodelphaxstriatellus)以持久性方式經卵傳播。本文通過構建對RSV傳毒能力差異明顯的兩個灰飛虱群體,并利用mRNA差異顯示(differentialdisplayRT-PCR,DDRT-PCR)技術分析了這兩個群體之間的基因差異,以期探討灰飛虱傳播RSV的分子機制。 從云南RSV病區(qū)采集灰飛虱
2、,通過連續(xù)多代的人工篩選,構建了對RSV親和性差異顯著的兩個灰飛虱群體。經生物學接種鑒定高親和性灰飛虱群體的發(fā)病率從F0代的16.4%上升到F2代的93.0%,F(xiàn)3到F7代都維持在90.0%左右。低親和性灰飛虱群體的發(fā)病率則一直維持在1%-2.5%。高親和性的群體在經過3代無人工選擇壓力后仍可保持90%以上的發(fā)病率。說明構建的高親和性群體不僅具有很高的帶毒率而且具有較好的遺傳穩(wěn)定性,這樣一個群體對于傳毒機制的研究、RSV致病性分化研究和
3、品種抗性分析都具有重要意義。 運用DDRT-PCR技術篩選高低親和性灰飛虱群體差異基因,結果表明在8條隨機引物中有4條能擴增出較好的差異條帶,差異片段重擴增效果也比較單一。這些隨機引物共篩選出差異條帶35條,挑選了其中差異明顯、重擴增效果好的6條進行了RNA斑點雜交驗證。結果表明其中4個片段為陽性,對陽性片段克隆測序、同源性比較。得知DD2序列為高親和性灰飛虱群體所特有,該序列與人類5-羥色胺受體1D(HTR1D)部分基因同源性
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