斜帶石斑魚(yú)GnRH和GnRH受體的克隆及其mRNA表達(dá)特性研究.pdf_第1頁(yè)
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1、本文采用RT-PCR方法和cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(RACE)，從斜帶石斑魚(yú)(Epinepheluscoioides)下丘腦總RNA中進(jìn)行擴(kuò)增，得到斜帶石斑魚(yú)sbGnRHcDNA全序列。該cDNA全長(zhǎng)408bp，編碼區(qū)285bp，所編碼的前體sbGnRH蛋白為94個(gè)氨基酸，包括22個(gè)氨基酸的信號(hào)肽、sbGnRH成熟十肽、加工位點(diǎn)(Gly-Lys-Arg)和GnRH聯(lián)合肽(GnRH-associatedpeptide，GAP)。同源性分析

2、表明，斜帶石斑魚(yú)sbGuRH與舌齒鱸(Dicentrarchuslabrax)sbGnRH同源性為72.3％，與鯔魚(yú)(Mugilcephalus)sbGnRH同源性為71.7％。進(jìn)化樹(shù)分析表明，斜帶石斑魚(yú)sbGnRH與鱸形目的狼鱸科(條紋狼鱸和舌齒鱸)、鯛科(金頭鯛和真鯛)、石首魚(yú)科(波紋絨須石首魚(yú)和紅擬石首魚(yú))魚(yú)類sbGnRH在同一進(jìn)化支上的不同分支，與鯛科的金頭鯛和真鯛親緣性最近。采用兩步法RT-PCR結(jié)合Southernblot分

3、析對(duì)sbGnRH在斜帶石斑魚(yú)成體各組織、胚胎發(fā)育和幼體發(fā)育早期的表達(dá)情況進(jìn)行了初步的研究。為了更好地了解GnRH在斜帶石斑魚(yú)中的生理功能，我們利用PCR方法從斜帶石斑魚(yú)垂體總RNA克隆了GnRH受體(GnRHR)的cDNA全長(zhǎng)序列。為了獲取GnRHR抗體，通過(guò)免疫組織化學(xué)方法來(lái)檢測(cè)斜帶石斑魚(yú)GnRHR蛋白在體內(nèi)的表達(dá)分布水平情況，將斜帶石斑魚(yú)GnRHR的開(kāi)放讀碼框(ORF)克隆于表達(dá)載體pET-22b。重組表達(dá)載體經(jīng)NdeI和XhoI雙

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