1、抗菌肽因其能夠成為新型食品生物防腐劑而引起了研究者的廣泛關注，其商業(yè)化的前提是得到足夠數(shù)量的高度純化的抗菌肽，異源表達是能夠生產抗菌肽的一種行之有效的手段。本研究以實驗室保存的具有良好活性的菌株Lac-B23為植物乳桿菌素（即抗菌肽）來源，將植物乳桿菌素成功在大腸桿菌中表達，并同時對誘導表達條件和菌株發(fā)酵條件進行優(yōu)化，以提高抗菌肽的產量。通過一系列實驗，獲得以下研究成果：
　　本研究以實驗室前期分離得到的植物乳桿菌Lac-B23為

2、實驗菌株，基于PCR方法，篩選出能夠產生單一穩(wěn)定明晰條帶的特異性引物，PCR擴增然后膠回收目的條帶，擴增產物測序并進行blast比對，確定克隆得到的該段基因為抗菌肽結構基因。以puc57為克隆載體，成功將目的基因與克隆載體相連。連接成功后，通過雙酶切、膠回收獲得目標片段；雙酶切表達載體 pCold，通過 T4連接酶將目標片段與pCold連接，并轉入嗜冷大腸桿菌中，選用IPTG為誘導劑，使抗菌肽結構基因成功的在嗜冷大腸桿菌中得到表達。同時

3、，選取對抗菌肽結構基因表達影響較大的誘導溫度、誘導菌體起始濃度、誘導時間和誘導劑 IPTG濃度四個因素進行單因素實驗，結果表明：誘導菌體起始濃度對重組抗菌肽活性影響最大，OD600=0.8是最適的誘導菌體起始濃度；誘導劑IPTG濃度為0.6mmol/L時，重組抗菌肽抑菌活性最大；低溫可以有效減少包涵體的形成，高溫不利于形成可溶性蛋白，15℃為最適溫度；誘導時間為16h時抑菌活性達到了最大值，并且誘導時間變化對重組抗菌肽的活性具有明顯影響

4、。發(fā)酵條件優(yōu)化表明碳源、氮源及微量金屬離子有利于抗菌肽活性的表達，葡萄糖濃度在15g/L時抑菌圈直徑有明顯提高，酵母粉濃度在10g/L時抑菌圈直徑沒有明顯提高并且因素不同濃度之間影響并不顯著。鈣離子對重組抗菌肽的活性有非常明顯的抑制作用，鎂離子和銅離子的影響不顯著，然而，隨著鉀離子濃度的變化，重組抗菌肽的抑菌活性有顯著變化。培養(yǎng)時間對重組抗菌肽活性有顯著影響，選取葡萄糖濃度、磷酸二氫鉀濃度、培養(yǎng)時間作為響應面實驗三個因素，優(yōu)化結果表明：