1、Bcl-2蛋白在其結構松散的loop區(qū)會發(fā)生多位點磷酸化修飾，其重要意義仍然存在爭議，有可能是缺少對于磷酸化Bcl-2結構生物學的研究。最近研究表明高表達磷酸化Bcl-2蛋白的細胞系對獲得FDA認證的Bcl-2抑制劑Venetoclax（ABT-199）產生耐藥性，同時對于ABT一系列的藥物包括ABT-737和ABT-263在許多癌癥中也存在耐藥性。對于磷酸化Bcl-2的結構研究將有助于我們理解磷酸化修飾的Bcl-2蛋白如何調節(jié)細胞凋亡

2、，并且可以解釋為何目前基于Bcl-2蛋白表面BH3溝槽設計的BH3模擬物小分子對于磷酸化Bcl-2會產生耐藥性。然而，由于Bcl-2結構特點帶有松散無結構的loop區(qū)，對溶液穩(wěn)定性有影響，所以無法獲得大量穩(wěn)定的蛋白，導致磷酸化Bcl-2的結構生物學研究受到阻礙。之前的工作研究是用結構修飾的Bcl-2/Bcl-xL嵌合體，然而T69，S70，和S87磷酸化位點都被忽視了。
　　我們構建一個模擬磷酸化的突變體Bcl-2(2-206)(

3、t69e，s70e和s87e)(EEE-Bcl-2(2-206))，即將磷酸化位點t69，s70，和s87突變成谷氨酸來模擬磷酸化的電荷，并將C末端氨基酸切除，進而提高溶液的穩(wěn)定性。為了進一步得到大量可溶、穩(wěn)定和滿足核磁譜圖需要的蛋白，我們構建了模擬磷酸化突變體Bcl-2(62-206)(t69e, s70e和s87e)（EEE-Bcl-2-EK），此突變體磷酸化位點突變成谷氨酸，保留磷酸化位點的前提下刪除 BH4域和部分 loop區(qū)（