1、馬流感（Equine influenza，EI）是由馬流感病毒（Equine Influenza Virus,EIV）引起的，以感染馬、驢等馬屬動物為主的急性、高度接觸性呼吸道傳染病。近年來，馬術賽事等相關行業(yè)蓬勃發(fā)展以及養(yǎng)馬業(yè)逐漸興起，EI的公共安全問題在國際和國內(nèi)都得到廣泛關注。
　　Tetherin蛋白被認為是對于包膜逆轉錄病毒具有廣泛限制作用的機體天然免疫蛋白。EIV是逆轉錄病毒的一種，已經(jīng)證實Tetherin能限制其出芽

2、。但是Tetherin蛋白在不同物種，甚至同一物種的不同個體中，都存在著基因水平的多樣性，序列差異從0.5％到4%不等，而序列上的差異可能會直接影響Tetherin對病毒的限制作用。本實驗通過采集馬匹血樣，抽提RNA、反轉錄DNA，連接到pLB載體送公司測序，然后從中保留存在突變序列，將突變序列連接到載體pCMV-10上，構建了Tetherin突變序列的真核表達載體。從18匹馬匹中，共獲得了124個Tetherin序列，其中存在突變序列

3、26個，突變類型包括替換、缺失以及提前終止，其中，兩個提前終止突變以及21號氨基酸位點突變極具參考價值。這些突變序列真核表達載體的成功構建，對于實驗室后續(xù)研究Tetherin各個位點的功能以及Tetherin多樣性與功能的聯(lián)系等方向提供了參考和支持。
　　病毒樣顆粒（Vriurs-likeParticles，VLPs）是近年來研究熱點，在新疫苗開發(fā)、分子載體以及研究某些特定蛋白的作用和病毒感染細胞機制等基礎研究方面具有廣泛應用。使

4、用哺乳動物細胞表達系統(tǒng)構建馬流感VLPs在之前的研究中未有報道，且哺乳動物細胞表達系統(tǒng)可以最高程度的修飾VLPs，使VLPs具有和天然病毒顆粒更相似的天然構象，特別是在基礎研究方面，該表達系統(tǒng)構建的VLPs具有更強的模擬性和過程重現(xiàn)性。本實驗選取馬流感H3N8(A/equine/Miami/1/63)的HA、NA、M1、M2這4個主要結構蛋白，構建真核表達載體，共轉染293T細胞收集細胞上清液中的VLPs。對上清液測血凝，血凝效價為23