瑞氏木霉內(nèi)切葡聚糖酶基因的克隆、表達(dá)及分子改造.pdf_第1頁(yè)
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1、該文首先采用剛果紅染色從瑞氏木霉cDNA文庫(kù)中分離得到一株具有CMCase活性陽(yáng)性克隆,測(cè)序結(jié)果顯示該基因所編碼的蛋白質(zhì)為瑞氏木霉內(nèi)切葡聚糖酶Ⅲ(EndoglucanaseⅢ,EGⅢ).然后利用PCR方法從瑞氏木霉cDNA文庫(kù)中擴(kuò)增出內(nèi)切葡聚糖酶I(EndoglucanaseI,EGI)全長(zhǎng)因因并克隆到釀酒酵母非整合型表達(dá)載體,pAJ401上,轉(zhuǎn)化到釀酒酵母中表達(dá)出具有活性的EGI酶蛋白.檢測(cè)了釀酒酵母蛋白質(zhì)分泌系統(tǒng)組分SSO2和SEB

2、1對(duì)EGⅢ分泌的影響.該文利用重組PCR技術(shù)將包含編碼內(nèi)切葡聚糖酶Ⅲ信號(hào)肽、纖維素結(jié)合結(jié)構(gòu)域和鏈接區(qū)的基因片段與編碼內(nèi)切葡聚糖酶I催化結(jié)構(gòu)域的基因片段重組為雜合酶基因,轉(zhuǎn)入釀酒酵母中表達(dá)出活性蛋白.與其親本相比,雜合酶對(duì)纖維素的吸附及降解能力都顯著降低.建立了雙層平板篩選由定向進(jìn)化方法產(chǎn)生的瑞氏木霉內(nèi)切葡聚糖酶Ⅲ突變體文庫(kù)的方法,根據(jù)水解圈在平板上形成的速度判斷酶活高低.利用定向進(jìn)化方法隨機(jī)突變溫纖維素酶瑞氏木霉EGⅢ的基因,得到了一株

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