1、目的：觀察內源性大麻素2-AG在大鼠保留性神經(jīng)損傷（spared nerve injury)神經(jīng)病理痛模型中鎮(zhèn)痛效應，確定劑量效應關系，計算半數(shù)有效量，并闡述其鎮(zhèn)痛效應的發(fā)生是否與抑制星形膠質細胞和神經(jīng)元細胞之間谷氨酸-谷氨酰胺循環(huán)有關。
　　方法：成年雄性SD(Sprague Dawley)大鼠48只，體重180?220g，隨機分為8組（n=6)，Normal組（空白組）：空白組不做任何處理；Sham組（假手術組)：分離暴露脛神

2、經(jīng)和腓總神經(jīng)后，僅穿線不結扎；SNI模型組：通過分離暴露坐骨神經(jīng)三個分支，結扎并切斷其中的脛神經(jīng)和腓總神經(jīng)，保留腓腸神經(jīng)完整來建立SNI模型，但不給予任何干預措施；N.S.組（生理鹽水組）：建立SNI模型成功后，鞘內穿刺注射150生理鹽水；2-AG干預1?4組：在建立SNI模型成功后，分別鞘內注射2-A G50nmol、100nmol、200nmol、400nmol。于手術前1日(BL。base line)，手術后1周（1week)及鞘

3、內給藥后15、30、45、60分鐘測定大鼠機械爪縮閾值（Mechanical withdrawal threshold，MWT)。在最后一次行為學實驗結束后，立即迅速處死大鼠并取脊髓標本，進行形態(tài)學及Western-Blot檢測。采用免疫熒光雙標記法觀察Normal組大鼠、SNI模型組大鼠及SNI神經(jīng)病理痛模型2-A G干預后，內源性大麻素受體C B1(cannabinoid receptor1)、CB2(cannabinoid rec

4、eptor2)在脊髓表達情況及與神經(jīng)元細胞、小膠質細胞、星形膠質細胞共表達情況;Normal組大鼠、SNI模型組大鼠及SNI模型組大鼠在2-AG干預后谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase，GS)的表達變化情況。Western-Blot實驗檢測大麻素受體CB1蛋白、CB2蛋白及GS蛋白表達量變化情況。
　　結果：行為學研究發(fā)現(xiàn)，Normal組與Sham組在術前及術后大鼠MWT均無統(tǒng)計學意義；與 Normal組相比

5、，SNI模型組大鼠MWT明顯下降（F(1,71)=3844.857。P<0.001)，在觀察期的（1week及15、30、45、60分鐘）時間點上也存在統(tǒng)計學意義（P<0.05); N.S.組與SNI模型組相比，大鼠MWT無統(tǒng)計學意義。鞘內注射不同劑量的內源性大麻素2-AG(50，100，200,400nmol；注射劑量15^l)后，觀察到隨著2-A G藥物濃度的增加，對SNI誘導的大鼠神經(jīng)病理性觸誘發(fā)痛的抑制效應逐漸增強，且成劑量依賴

6、關系。與 SNI模型組相比，2-AG400 nmol>200 nmol、100nmol、50nmol組大鼠MWT的上升均有統(tǒng)計學意義(2-AG400 nmol：F(1,71)=100.898。P<0.001；2-AG200 nmol：F(1,71)=15.207,P=0.011;2-A G100 n mol：F(1,71)=20.214。P=0.006;2-AG50 nmol：F(1,71)=36.554。P=0.002)。通過線性回歸

7、統(tǒng)計分析，得出2-A G在SNI神經(jīng)病理性疼痛模型中，鎮(zhèn)痛作用的半數(shù)有效量（ED5Q)值為227.25nmol。形態(tài)學研究顯示，與Normal組相比，神經(jīng)元細胞、星形膠質細胞以及小膠質細胞在SNI模型組均不同程度的被激活；在Normal組觀察到，CB1受體在神經(jīng)元、星形膠質細胞以及小膠質細胞均有表達，SNI組的CB1受體表達明顯增強，且主要與星形膠質細胞共表達；2-AG干預后，神經(jīng)元、星形膠質細胞以及小膠質細胞的表達減弱，同時CB1受體

8、的表達亦減弱。在Normal組和SNI組均未觀察到CB2受體的表達。在Normal組觀察GS的表達，發(fā)現(xiàn)呈低表達；在SNI組，GS的表達明顯增強，主要在星形膠質細胞上表達；2-AG干預后，明顯的抑制了GS的表達和GS與星形膠質細胞的共表達。Western-blot檢測顯示，CB1受體在SNI組的表達明顯高于Normal組，具有統(tǒng)計學差異（P<0.001)，2-A G的干預未能影響C B1受體的表達；C B2受體在Normal組未檢測出表

9、達，但在SNI組表達量明顯提高(P<0.001)，且2-A G的干預后，CB2受體蛋白的表達有所下降(P<0.01);同Normal組比較，GS蛋白在SNI組表達明顯提高(P<0.001);2-A G干預后，GS蛋白的表達明顯下降（P<0.001)。
　　結論：內源性大麻素2-AG抑制了 SNI誘導的神經(jīng)病理性觸誘發(fā)痛，該鎮(zhèn)痛效應的機制之一可能是通過內源性大麻素2-AG作用于星形膠質細胞上大麻素CB1受體，抑制了星形膠質細胞與神經(jīng)