1、目的：
　　1.分析2011年～2015年間溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院臨床尿液標本中分離的大腸埃希菌對磷霉素及其他抗菌藥物耐藥現狀，為臨床控制大腸埃希菌感染及其抗菌藥物的合理使用提供指導。
　　2.進一步探討磷霉素耐藥大腸埃希菌耐藥機制及其流行特性，為合理使用磷霉素、預防耐藥菌的產生和播散、保護磷霉素敏感性提供理論依據。
　　方法：
　　1.回顧性分析2011-2015年間溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院臨床尿液標本分離的

2、大腸埃希菌對臨床常用抗菌藥物的敏感性。瓊脂稀釋法檢測磷霉素的最低抑菌濃度（Mininal Inhibotory Concentrations,MIC）。
　　2.PCR法擴增產ESBL大腸埃希菌菌株的ESBL基因型，比較不同ESBL基因型菌株對磷霉素的耐藥情況。
　　3.PCR法擴增磷霉素耐藥fos基因:選取30株磷霉素耐藥菌株以及同期臨床分離的30株磷霉素敏感菌株進行fosA、fosA3、fosB、fosB2、fosC、f

3、osC2、fosX基因檢測。
　　4.轉運系統(tǒng)和靶酶相關基因檢測:分別對6株磷霉素耐藥fos基因陰性菌株、6株磷霉素敏感菌株、6株磷霉素耐藥且fos基因陽性菌株進行murA、glpT、uhpT等基因檢測，數據庫比對其差異。
　　5.通過Southern雜交對磷霉素耐藥菌株進行基因定位分析，以E.coli J53為受體菌，對磷霉素耐藥菌株進行接合轉移試驗，分析耐藥基因所在質粒的水平轉移特性。
　　6.脈沖場凝膠電泳(PF

4、GE)分析菌株間的同源性以及多位點序列分型(MLST)對菌株進行分型研究，同時與美國疾病控制和預防中心網站（http://www.cdc.gov/pulsenet/protocols.htm）進行比對分析。
　　結果：
　　1.636株分離自臨床尿液標本的大腸埃希菌中，ESBL陽性356株，占56.0％，ESBL陰性280株，占44.0％。藥敏結果顯示，分離株對頭孢替坦、碳青霉烯類、哌拉西林/他唑巴坦等少數抗菌藥物高度敏感，

5、敏感率在95％以上，對磷霉素的敏感性保持在95％左右;產ESBL大腸埃希菌對大多數抗菌藥物的耐藥率明顯高于非產ESBL菌株，其中產ESBL菌株磷霉素的耐藥率為6.7％，也明顯高于ESBL陰性菌株的2.1％。
　　2.產ESBL大腸埃希菌的ESBL基因型主要為blaCTX-M型，其中blaCTX-M-1陽性率為54.2％，blaCTX-M-9陽性率為34.6％。blaCTX-M-1陽性組對磷霉素的敏感率為91.2％，blaCTX-M

6、-9陽性組對磷霉素的敏感率為95.1％，不同blaCTX-M型別與磷霉素耐藥率無統(tǒng)計學差異（p值為0.19）。
　　3.30株磷霉素耐藥菌株中24株fosA3基因陽性，陽性檢出率為80％，未檢測到其它fos基因。
　　4.6株磷霉素耐藥fos基因陰性菌株的murA、glpT、uhpT的測序結果與NCBI數據庫中標準菌株E.coli K-12進行比對，其中DC1917、DC2091、DC25菌株中GlpT第297位上亮氨酸被苯

7、丙氨酸替換，DC1917和DC2091菌株中第28位上異亮氨酸被天冬氨酰替代，另外DC25、DC93中30位也發(fā)生了替換;所有菌株UhpT均未出現氨基酸替換現象;DC1848、DC726既不攜帶磷霉素修飾基因，也未發(fā)生靶酶、磷霉素轉運系統(tǒng)的突變。
　　5.30株磷霉素耐藥菌株為供體菌，J53為受體菌，得到的接合子通過藥敏、耐藥基因PCR以及質粒提取等方法確認，最終獲得14株磷霉素耐藥接合子。
　　6.Southern雜交結果

8、顯示，fosA3基因位于～54.2Kb大小的可轉移質粒上。部分菌株存在兩個質粒攜帶fosA3基因的現象。
　　7.PFGE結果顯示，fosA3陽性菌株之間同源性較低，MLST分型表明菌株ST分型較為分散，不存在克隆傳播的現象。
　　結論：
　　1.尿液標本分離的大腸埃希菌對臨床常用抗菌藥物耐藥現象比較嚴重，除對碳青霉烯類、哌拉西林/他巴唑坦等少數臨床常用抗菌藥物保持較高的敏感性外，對磷霉素也顯示較好的敏感性，敏感率達9