1、背景：非小細胞肺癌(NSCLC)在肺癌中占80％，化療是臨床上常用的治療方法之一，但是嚴重的毒副作用及化療耐藥的發(fā)生在很大程度上影響了其治療效果。替莫唑胺(Temozolomide，TMZ)是烷化劑類藥物氮烯唑胺的衍生物，紫蘇醇(Perillyl alcohol，POH)在多種類型的腫瘤中對TMZ具有治療增敏作用。TMZ-POH是將TMZ和POH以共價鍵連接形成的新型烷化劑，在三陰性乳腺癌、非小細胞肺癌、人類鼻咽癌，甚至是TMZ耐藥的神

2、經(jīng)膠質(zhì)瘤中，TMZ-POH比TMZ、POH單獨用藥或二者聯(lián)合應用具有更強的抗腫瘤作用。MGMT是一種進化保守的酶，在多種癌癥中的高表達往往提示預后較差，且表達水平受到多重作用機制的調(diào)控。MGMT能夠移除TMZ的細胞毒性產(chǎn)物O6-meG，并使其失活，這是MGMT誘導TMZ化療耐藥發(fā)生的決定性因素。在不同腫瘤細胞中的研究發(fā)現(xiàn)，TMZ-POH與TMZ等烷化劑不同，前者即使在MGMT高表達的細胞系中同樣能發(fā)揮較強的細胞毒性作用，這意味著TMZ-

3、POH可能通過調(diào)控MGMT來克服在其他烷化劑中發(fā)生的耐藥。
　　目的：研究TMZ-POH對非小細胞肺癌的抗腫瘤作用，并探索其作用機制是否與ROS累積相關;研究TMZ-POH對MGMT的調(diào)控作用以及MGMT對TMZ-POH細胞毒性的影響。
　　方法：將TMZ和POH以共價鍵連接形成新型烷化劑TMZ-POH，將其作用于所培養(yǎng)的腫瘤細胞系，通過細胞活性測定、克隆形成實驗、活性氧ROS測定、線粒體膜電位定位測定和蛋白印跡等體外實驗以

4、及體內(nèi)實驗研究TMZ-POH的抗腫瘤作用及機制。
　　結(jié)果：TMZ-POH對NSCLC細胞系A549、H460和H520均具有細胞毒性作用，上調(diào)磷酸化的ATM、CHEK1、CHEK2、H2AFX蛋白表達，將細胞周期阻滯在G2/M期，并且導致細胞凋亡、線粒體膜電位降低和活性氧累積;TMZ-POH在A549和SPC-A1(NSCLC來源)、A2780（卵巢癌來源系）以及CNE2（人鼻咽癌來源）等多種細胞系中，均能下調(diào)MGMT蛋白表達，

5、在A549和SPC-A1細胞系中發(fā)現(xiàn)，該調(diào)控作用不引起Wnt/β-catenin通路上的β-catenin以及GSK-3β表達水平的差異，用蛋白酶體抑制劑MG132進行預處理之后，TMZ-POH誘導了更高水平的泛素化。
　　結(jié)論：新型化合物TMZ-POH在NSCLC中具有抗腫瘤作用，這種抗腫瘤作用是通過介導ROS累積完成的，能導致線粒體膜電位降低、線粒體凋亡、DNA損傷和細胞周期阻滯，進而抑制腫瘤生長。TMZ-POH能通過獨立的蛋