1、背景：高遷移率族蛋白B1(HMGB1)是一種普遍存在于真核細(xì)胞內(nèi)的高度保守的非組蛋白染色質(zhì)結(jié)合蛋白，參與DNA修復(fù)、重組、復(fù)制及轉(zhuǎn)錄等多種生命活動。研究發(fā)現(xiàn)，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，被釋放到細(xì)胞外的HMGB1明顯增多。胞外HMGB1通過與靶細(xì)胞上的受體TLRs或RAGE結(jié)合，激活一系列信號通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移，而HMGB1拮抗劑能夠有效地抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。我們據(jù)此推測，以HMGB1蛋白制備的疫苗進(jìn)行主動免疫可能會影響宿主

2、腫瘤細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移。
　　目的：利用在原核系統(tǒng)表達(dá)、純化的重組人HMGB1蛋白作為免疫源并給予小鼠進(jìn)行主動免疫，繼而對免疫成功的小鼠乳腺癌移植瘤的生長情況做初步的評估。
　　方法：將本課題組成功構(gòu)建的含有人HMGB1基因的pET28a-HMGB1導(dǎo)入大腸桿菌BL21內(nèi)，以乳糖（1g/L）誘導(dǎo)HMGB1蛋白表達(dá)，通過SDS-PAGE及Western Blotting進(jìn)行檢測和鑒定。進(jìn)一步通過鎳柱親和層析系統(tǒng)分離純化重組的HM

3、GB1蛋白。將純化的重組HMGB1蛋白與弗氏佐劑混合制備成疫苗，對BALB/c小鼠背部皮下多點注射進(jìn)行免疫，對照組小鼠給予等量PBS注射。用間接ELISA法檢測小鼠血清中抗HMGB1抗體效價。待抗體效價穩(wěn)定后，將4T1乳腺癌細(xì)胞接種于小鼠右腋皮下建立移植瘤模型。成瘤后，每隔兩天用游標(biāo)卡尺測量腫瘤組織的最長徑和最短徑計算相對腫瘤體積和相對腫瘤增殖率;采用雙抗體夾心ELISA測定不同時間點小鼠血清中HMGB1表達(dá)水平。根據(jù)HMGB1免疫組小

4、鼠和對照組小鼠的相對腫瘤體積、實體瘤重量、組織學(xué)觀察、抑瘤率等指標(biāo)來初步評估HMGB1主動免疫對乳腺癌移植瘤生長的影響。
　　結(jié)果：SDS-PAGE及Western Blotting結(jié)果表明成功得到重組人HMGB1蛋白。以HMGB蛋白作為免疫源免疫雌性BALB/c小鼠后，小鼠血清中抗HMGB1抗體呈陽性，且隨著免疫次數(shù)的增加，抗體滴度逐漸升高，經(jīng)過6次免疫后，小鼠體內(nèi)抗HMGB1抗體效價逐漸趨于穩(wěn)定，對照組小鼠血清中抗HMGB1抗

5、體為陰性。接種4T1乳腺癌細(xì)胞株后第六天，在HMGB1免疫組及對照組小鼠的接種部位可觸及不同程度大小的皮下瘤結(jié)節(jié)，成瘤率100％。隨著接種時間的延長，兩組小鼠荷瘤體積逐漸地增大，HMGB1免疫組小鼠腫瘤生長速度快于對照組，實體瘤重量也高于對照組(2.337±0.3122g vs1.997±0.2401g)，抑瘤率為-17％。雙抗體夾心ELISA結(jié)果顯示，HMGB1免疫組小鼠荷瘤后，其血清中HMGB1表達(dá)水平明顯低于對照組。
　　結(jié)