1、研究背景：
　　 動脈粥樣硬化(atherosclerosis， AS)是常見的心腦血管疾病， 體內高密度脂蛋白High density lipoprotein， HDL)降低是 AS 形成的危險因素之一。法尼酯 X 受體Farnesoid X receptor, FXR)是一種參與調控脂代謝的核受體，以鵝脫氧膽汁酸Chenodexycholicacid, CDCA)為最適天然配體，其基因敲除模型表現(xiàn)出HDL 清除率下降。FXR

2、在肝、小腸、腎上腺皮質等組織細胞高表達,而在血管內皮細胞、平滑肌細胞、巨噬細胞中有少量表達。 FXR 可通過調控脂代謝相關基因，而影響血中HDL,LDL,TG的水平。脂質轉運抑制蛋白（Lipid transfer inhibitor protein，LTIP），又稱載脂蛋白F（apolipoproteinF, apo F),在血漿中主要存在于高密度脂蛋白(High density lipoprotein，HDL)中，少量存在低密度脂蛋白

3、中（Low density lipoprotein，LDL）,其生理作用是抑制膽固醇酯轉運蛋白（Cholesterol ester transfer protein, CETP）介導的脂蛋白之間的膽固醇酯（Cholesterol ester, CE）和甘油三酯(triglyceride, TG)的交換。CETP 介導的這種脂質交換可降低血中HDL的水平,故CETP的人工合成抑制劑被認為有望成為治療動脈粥樣硬化的藥物。LTIP作為天然存在

4、的蛋白質分子，發(fā)揮抑制CETP 活性的作用，LTIP在AS 發(fā)生、發(fā)展中呈負相關。在所查國內外文獻中, 未見FXR 影響LTIP表達的報道。因此，本研究通過觀察 FXR 激動劑對 LTIP基因表達的影響及探討其調控機制，為FXR 調節(jié)LTIP及在脂代謝中的作用提供實驗依據(jù)及為心腦血管疾病防治提供新的靶標分子。
　　 研究目的：探討FXR對LTIP表達的影響及可能的分子調控機制研究方法：
　　 （1）FXR 激動劑CDCA

5、和GW4064分別處理肝細胞系HepG2和L02，24小時后用RT-PCR和reAltime PCR 檢測LTIP基因Mrna水平的變化, Western Blotting 檢測LTIP基因蛋白水平的變化（2）生物信息學方法分析LTIP基因啟動子序列，搜索FXR 可能的結合位點，分別構建兩段含或不含預測的FXR 結合位點的序列，構建到報告基因載體Pgl3-basic上，通過報告基因實驗分析LTIP 啟動子序列的活性，進而初步確定LTIP

6、 啟動子區(qū)的FXR 結合位點所在范圍。隨后通過染色質免疫共沉淀（Chromatinimmuno-precipitation,ChIP）分析培養(yǎng)細胞內FXR與LTIP基因啟動子序列FXR 結合位點的相互作用。
　　 （3）以雄性C57/BL6為動物模型，隨機分為三組，以不同劑量的CDCA 灌胃處理7天，取肝臟組織提總RNA和總蛋白，RT-PCR和Western Blotting 法檢測LTIP Mrna和蛋白水平變化。
　　

7、 研究結果：
　　 （1）FXR 激動劑CDCA和GW4064分別作用于 L02和HepG2細胞24 h，隨著濃度的增加(CDCA 0μmol/L，25μmol/L，50μmol/L，100μmol/L；GW4064 0μmol/L，0.02μmol/L，0.2μmol/L，2 μmol/L)，與對照組相比，LTIP Mrna水平均顯著升高 (P<0.05)，蛋白水平均顯著升高（P<0.05），呈劑量依賴型。
　　 （

8、2）分析LTIP基因啟動子區(qū)-3000bp 序列，得到可能的FXR 結合位點ER1，通過克隆含有ER1結合位點的長序列（-3289～+22bp）和不含有ER1結合位點的短序列（-1872～+36bp），裝載到含有報告基因的質粒Pgl3-basic，得到質粒Pgl3-basic/ApoF(-3289～+22bp)和Pgl3-basic/ApoF（-1872～+36bp），瞬時共轉染和報告基因實驗表明含有ER1結合位點的長序列（-3289～

9、+22bp）具有明顯的激活轉錄活性，而不含有ER1結合位點的短序列（-1872～+36bp）不具備轉錄活性。HepG2細胞經(jīng)CDCA 處理后進行ChIP 實驗，加入抗FXR抗體的處理組擴增出長為196bp 包含LTIP 啟動子區(qū)-2904bp 處ER1的序列（-2955～-2759bp），而陰性對照組未有明顯擴增，（3）經(jīng)不同劑量CDCA 處理7天后C57BL/6小鼠肝臟組織的Mrna水平和蛋白水平明顯升高（P<0.05），呈劑量依賴型

10、。
　　 結論：
　　 （1）FXR 激動劑CDCA和GW4064能顯著上調LTIP基因在HepG2和L02細胞中的Mrna和蛋白水平。
　　 （2）人LTIP 啟動子區(qū)含有ER1結合位點的-3289～-1872bp的這段序列具有明顯的激活轉錄的活性。包含ER1結合位點的-2955～-2759bp 這段序列在HepG2細胞中能與FXR 結合，F(xiàn)XR 可能通過與ER1結合發(fā)揮轉錄調控作用。
　　 （3）FX