1、目的：1、對己內酰胺環(huán)進行替換和改造，獲得Capuramycin同系物，以期產生具更高成藥價值的前體化合物；闡明負責內酰胺環(huán)連接的酶的催化機制，為未來以組合生物合成的方式構建“非天然Capuramycin同系物庫”提供有益信息。2、獲得的Albomycin生物合成信息，為此類化合物生物合成模式的建立提供依據(jù)；研究負責鐵色素生物合成及耦合的酶，闡明其作用機制，為應用基因工程、組合生物合成、以及半合成等策略建立一個“高鐵霉素”同系物庫提供依

2、據(jù)。
　　方法：1、目的基因的滅活與互補，微生物發(fā)酵，A-503083F的分離純化，原生質體轉化，蛋白的異源表達及分離純化，體外酶催化，HPLC檢測酶活。2、微生物發(fā)酵，目的基因的滅活與互補，Albomycin鐵色素的分離純化及鑒定，原生質體轉化，鐵色素的異源表達及分離純化，HPLC檢測。
　　結果：1、運用基因敲除及組合生物學的技術手段成功獲得Capuramycin A-503083F的生產菌株；依據(jù)Capuramycin

3、的化學結構，采用底物添加等手段優(yōu)化發(fā)酵條件，并采用SP-207、HW-40F及HPLC聯(lián)用分離純化獲得了503083F純品；對目的基因進行異源表達，并將目的產物進行體外酶催化，對催化反應進行HPLC分析，已確證反應發(fā)生。2、依據(jù)Albomycin生物合成信息，分離純化獲得了Albomycin的鐵色素部分，為組合生物合成Albomycin鐵色素作標準品對照。運用基因敲除及組合生物學的技術手段，對鐵色素生物合成基因簇進行異源表達，采用底物添

4、加及調PH值等手段優(yōu)化了工程菌株發(fā)酵條件，為構建鐵色素生物合成體系奠定基礎。
　　結論：1、在發(fā)酵過程中采取底物添加及調PH值等手段可優(yōu)化菌株發(fā)酵條件。2、采用宿主S.lividans TK-64可進行CapW和Albomycin鐵色素的異源表達。3、本研究初步闡明負責內酰胺環(huán)連接的酶的催化機制，并通過體外酶催化反應獲得Capuramycin同系物，證明了體外構建“非天然Capuramycin同系物庫”的可能性。4、初步獲得的Al