1、囊狀幼蟲病(Sacbrood Disease，SBD)是中華蜜蜂(Apis cerana cerana，以下簡稱為中蜂)幼蟲期最主要的病毒性病害，可導致幼蟲死亡，進而蜂群數量急劇減少。中華蜜蜂囊狀幼蟲病毒(Chinese Sacbrood Virus，CSBV)是引起中華蜜蜂囊狀幼蟲病的病原，已成為近幾年來在蜜蜂中分布最為廣泛的病毒之一。本文在調查中華蜜蜂囊狀幼蟲病毒流行分布規(guī)律的基礎上，對CSBV結構蛋白VP1的分子生物學特性進行了研

2、究，并對響應CSBV感染的兩個免疫相關基因SRP9和GABARAP進行了分子克隆、生物信息分析和原核表達研究。
　　主要結果如下:
　　1、中華蜜蜂囊狀幼蟲病毒檢測及流行規(guī)律調查。采用RT-PCR方法，病毒檢測發(fā)現，CSBV感染率高達94.59％，其次為黑蜂王臺病毒(Black queen cell virus，BQCV)，檢出率達77.03％。說明CSBV是中華蜜蜂中發(fā)病率最高的病毒。在我國東北、華北、華中、華南、西南、東

3、部均能檢測到CSBV病毒，發(fā)生的地點與我國主要的流蜜期路線相吻合，且存在廣泛的混合感染問題。全年發(fā)生情況一直較為嚴重，春繁時期最易感染，呈現1-4月份逐步升高的趨勢，6-9月份有所緩和，但10-11月份后又開始上升。
　　2、中華蜜蜂囊狀幼蟲病毒純化及電鏡觀察。采用超高速離心和蔗糖密度梯度離心的方法，獲得了CSBV-BJ和CSBV-SX兩個純化CSBV病毒。實驗觀察到CSBV-BJ和CSBV-SX病毒粒子，病毒粒子的形狀接近圓形(

4、直徑約30nm)，接近二十面體的球形。
　　3、中華蜜蜂囊狀幼蟲病毒VP1蛋白單克隆抗體制備。對CSBV-BJ-VP1進行克隆，獲得有效序列長945bp，編碼315個氨基酸，Nbp/3。該基因的預測分子量和等電點分別約為35.59kDa和9.38。對VP1進行原核表達，構建pET-32a-CSBV-BJ-VP1質粒，優(yōu)化原核表達條件，在37℃培養(yǎng)，菌株OD600=1.0，IPTG濃度為1.0mM時，獲得重組蛋白。將該蛋白免疫小鼠，

5、成功制備了2株VP1單克隆抗體腹水，單抗的亞類均為IgG2a，輕鏈為κ鏈。
　　4、中華蜜蜂SRP9基因克隆、生物信息分析及原核表達。采用RT-PCR方法，擴增有效序列長為237bp，編碼78個氨基酸，(Nbp-3)/3，相對分子量為9.36kDa，等電點為9.17。系統(tǒng)進化樹分析表明，中華蜜蜂SRP9與西方蜜蜂Apis mellifera和小蜜蜂Apis florea的SRP9聚成一支。蛋白質二級結構預測發(fā)現其含有2個α-螺旋區(qū)

6、和3個β-折疊區(qū)。同源建模獲得蛋白質的三維結構。原核表達后發(fā)現該重組蛋白表達在包涵體中，經洗包涵體方法純化，獲得了帶有GST標簽的重組蛋白。采用熒光定量PCR方法，研究了SRP9基因的表達特性，結果表明，在接種CSBV后，中蜂幼蟲體內SRP9基因表達量顯著提高。
　　5、中華蜜蜂GABARAP基因克隆、生物信息分析及原核表達。采用RT-PCR方法，擴增獲得有效序列354bp，編碼117個氨基酸，(Nbp-3)/3，預測分子量為13

7、.99kDa，等電點為9.48。系統(tǒng)進化樹分析表明，中華蜜蜂GABARAP與同西方蜜蜂Apis mellifera、小蜜蜂Apis florea、大蜜蜂Apis dorsata、歐洲熊蜂Bombus terrestris、東方熊蜂Bombus impatiens的GABARAP蛋白處于同一個簇中。蛋白質二級結構預測發(fā)現其含有3個α螺旋和4個β折疊結構。同源建模獲得蛋白質的三維結構。原核表達后發(fā)現該重組蛋白表達在包涵體中，經His標簽蛋白