1、熱應(yīng)激引起雄性生殖器官功能損傷，導(dǎo)致精子活力、頂體完整率下降和精子畸形率升高，使精液品質(zhì)和繁殖能力降低。同時(shí)熱應(yīng)激會(huì)引起睪丸組織活性氧的產(chǎn)生和代謝的不平衡，從而誘導(dǎo)睪丸氧化應(yīng)激。鋅作為一種重要的微量元素，不僅具有促生長(zhǎng)和抗氧化作用，同時(shí)也具有生殖保護(hù)作用。本研究以雄性小鼠和巴馬小香豬為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行預(yù)飼添加不同鋅濃度日糧，繼而進(jìn)行熱暴露處理，通過觀察各組小鼠、巴馬小香豬睪丸組織的顯微結(jié)構(gòu)，檢測(cè)分析睪丸組織的抗氧化水平、Cu-Zn S

2、OD蛋白、Nrf2-Keap1/ARE通路中相關(guān)基因以及與自噬相關(guān)的P62蛋白、基因的表達(dá)變化，研究日糧鋅對(duì)熱暴露引起的雄性小鼠和巴馬香豬生殖損傷的保護(hù)作用，為全面評(píng)價(jià)日糧鋅對(duì)生殖損傷的保護(hù)機(jī)制提供科學(xué)的理論依據(jù)。主要研究如下:
　　1、日糧鋅對(duì)熱暴露小鼠睪丸損傷的影響
　　選用24只8周齡的ICR雄性小鼠，隨機(jī)分為2組，每組12只。飼喂正常鋅和添加鋅250 mg/kg兩種鋅濃度的飼料，自由采食和飲水。飼喂一個(gè)月后，每組隨機(jī)

3、選取6只進(jìn)行連續(xù)8d，每天2h，40-42℃的全身熱暴露，并在每天熱暴露后稱其體重及采食量。最后一次熱暴露后，采集各小鼠的睪丸組織樣品進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、抗氧化指標(biāo)的測(cè)定以及Cu-Zn SOD、Nrf2蛋白的表達(dá)。試驗(yàn)結(jié)果表明，各組小鼠間體重、平均日增重均沒有顯著性差異(P＞0.05)，平均日采食量在正常鋅熱暴露組顯著降低(P＜0.05)，但在加鋅熱暴露組中顯著升高(P＜0.05);睪丸指數(shù)在正常鋅熱暴露組中顯著提高(P＜0.01)，同時(shí)在

4、加鋅熱暴露組中顯著下降(P＜0.01);熱暴露組睪丸組織結(jié)構(gòu)不完整，生精小管脫落，排列不整齊;睪丸組織Cu-Zn SOD含量在正常鋅熱暴露組中顯著降低(P＜0.01)，而H2O2、 GPX和γ-GCS含量在各組間均無顯著性差異(P＞0.05);Western blot結(jié)果顯示，正常鋅組在熱暴露后，睪丸組織中Cu-Zn SOD蛋白表達(dá)量極顯著降低(P＜0.01)，加鋅熱暴露組也降低其表達(dá)，但極顯著的高于正常鋅熱暴露組(P＜0.01);睪丸

5、細(xì)胞核Nrf2蛋白表達(dá)量與正常鋅非熱應(yīng)激組相比，熱暴露組，加鋅組以及加鋅熱暴露組中都極顯著地升高(P＜0.01)。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，熱暴露引起雄性小鼠睪丸組織產(chǎn)生氧化損傷，同時(shí)，加鋅可通過激活Cu-Zn SOD緩解這種損傷。
　　2、日糧鋅對(duì)熱暴露巴馬香豬生長(zhǎng)性能的影響
　　選用24頭6月齡的雄性巴馬小香豬，隨機(jī)分為2組，每組12頭。飼喂正常鋅和添加鋅1500 mg/kg兩種鋅濃度的飼料，自由采食和飲水。一個(gè)月后每組隨機(jī)選取

6、6頭進(jìn)行連續(xù)8d，每天5h，40℃的全身熱暴露，并在熱暴露的第1、4和8天對(duì)所有香豬進(jìn)行頸動(dòng)脈采血以及體重、采食量的統(tǒng)計(jì)。最后一次熱暴露后，采集血液及各臟器，進(jìn)行鋅含量、血液生化指標(biāo)及激素的測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果顯示:加鋅使體增重、平均日增重和飼料轉(zhuǎn)換率都顯著升高(P＜0.05);加鋅組豬的脾臟指數(shù)顯著低于正常鋅組(P＜0.05)，但其他臟器指數(shù)都無顯著性變化(P＞0.05);在1500 mg/kg加鋅組中，血清、心臟、腎臟、睪丸、附睪、毛發(fā)、

7、背最長(zhǎng)肌和糞便中鋅的含量顯著升高(P＜0.05)，同時(shí)熱暴露血清中鋅的含量顯著低于非熱應(yīng)激組(P＜0.05);熱暴露第1天，與非熱暴露組相比，正常鋅熱暴露組血清睪酮水平極顯著升高(P＜0.01)。上述結(jié)果表明，預(yù)飼額外添加鋅1500 mg/kg的飼料，可一定程度地緩解熱暴露引起的巴馬香豬血清鋅濃度的降低，并提高生產(chǎn)性能。
　　3、日糧鋅對(duì)熱暴露巴馬香豬睪丸氧化損傷的保護(hù)機(jī)制
　　選用24頭性成熟的雄性巴馬小香豬，隨機(jī)分為2組

8、，每組12頭。飼喂正常鋅和添加鋅1500 mg/kg兩種鋅濃度的飼料，自由采食和飲水，飼喂一個(gè)月后，每個(gè)濃度隨機(jī)選取6頭進(jìn)行連續(xù)8d，每天5h，40℃的全身熱暴露。最后一次熱暴露后，采集睪丸組織。試驗(yàn)結(jié)果顯示:正常鋅組熱暴露后，MDA水平顯著升高(P＜0.05)，加鋅熱暴露組中Cu-Zn SOD顯著低于非熱暴露組(P＜0.05);HE染色結(jié)果顯示正常鋅熱暴露引起生精小管脫落，間質(zhì)輕微松散;免疫組化結(jié)果顯示加鋅可顯著增強(qiáng)睪丸間質(zhì)細(xì)胞中AR

9、、Cu-Zn SOD和P62蛋白的表達(dá)，同時(shí)熱暴露會(huì)減弱前兩者的表達(dá)量，但熱暴露和加鋅都可使P62蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng);熱暴露使Nrf2的調(diào)控基因NQO1和GCLC mRNA表達(dá)水平在正常鋅組中極顯著升高(P＜0.01)，而加鋅并不影響其表達(dá)量，但加鋅熱暴露可引起P62 mRNA水平極顯著升高(P＜0.01)。上述結(jié)果表明，飼喂1500 mg/kg加鋅日糧可通過激活Nrf2-Keap1/ARE通路，一定程度地緩解熱暴露引起的睪丸氧化損傷，但