1、目的：
　　構建攜帶HBVx基因的慢病毒表達載體，感染14-19肝前體細胞使其穩(wěn)定表達HBVx基因。通過門靜脈注射肝前體細胞入動物體內，將HBVx基因導入動物體內后建立動物模型，分別檢測小鼠各個組織中HBVx目的基因的表達情況，重點探討在HBVx基因對肝臟的作用以及發(fā)生的一系列生物學變化。
　　方法：
　?。?）通過PCR擴增HBVx目的基因，使之與慢病毒表達載體(pLenti-CMV-HA-3FLAG-PGK-EGF

2、P-F2A-Puro)連接，后通過酶切、菌落PCR、測序驗證質粒是否成功構建。
　?。?）病毒構建成功后，感染14-19肝前體細胞，用嘌呤霉素(puromycin)連續(xù)篩選4周攜帶HBVx14-19肝前體細胞，使用PCR、western blot進行細胞HBVx目的基因、蛋白質檢測。
　?。?）同時進行門靜脈動物模型構建，分別在第3、7、14、30、60天用定量PCR方法進行檢測小鼠各個組織器官中的HBVx的表達情況，同時使

3、用酶聯免疫吸附法測定小鼠血清內AFP和ALT的表達量。
　　結果：
　　（1）成功構建攜帶HBVx的慢病毒表達質粒，并用慢病毒(pLenti-CMV-HA-3FLAG-PGK-EGFP-F2A-Puro)成功感染14-19肝前體細胞，通過使用嘌呤霉素(puromycin)連續(xù)四周的篩選，成功構建了穩(wěn)定攜帶HBVx的14-19肝前體細胞。
　?。?）成功構建門靜脈動物模型。并分別于第3、7、14、30、60天用定量PCR

4、方法進行檢測小鼠各個組織器官中的HBVx的表達情況，發(fā)現HBVx只在在肝臟中表達，不在其他組織內表達；使用Elisa方法分別測定第3、7、14、30、60天的小鼠血清中AFP、ALT的表達含量，同對照組相比的結果顯示，實驗組小鼠血清內的 AFP、ALT含量均升高。
　　結論：
　　攜帶HBVx的肝前體細胞可在體內穩(wěn)定表達。通過檢測各組織HBVx的表達量，說明HBVx具有嗜肝性，不累及其他臟器。構建了一個長期表達HBVx的動物