1、雞球蟲病(Coccidiosis)是由一種以腸道病變?yōu)橹鞯募纳x病,給養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大經濟損失。目前雞球蟲病主要以藥物防治為主,但由于藥物殘留和耐藥性問題,使得一些藥物難以發(fā)揮其有效的療效。球蟲疫苗的研究,特別是新型球蟲核酸疫苗研究,逐漸成為球蟲病防治研究的新焦點。
　　 本試驗根據(jù)已發(fā)表的堆型艾美爾球蟲(E.acervulina)EalA基因序列設計引物,成功克隆上海株堆型艾美爾球蟲的部分EalA基因,大小為1256bp。同時

2、構建EalA和ChIL-18的原核表達質粒,表達大小分別為51Kda和26Kda的EalA和ChIL-18蛋白,利用鎳離子親和樹脂純化后免疫新西蘭白兔,制備兔抗EalA和ChIL-18多克隆抗體。經間接免疫熒光試驗和Westernblot證明制備的多克隆抗體均具有良好的反應性。
　　 本研究利用一段編碼(G4S)3多肽的堿基linker序列將3-1E與EalA基因進行連接,成功構建了一個融合基因真核表達載體質粒,即PVAX-3-

3、1E-linker-EalA質粒。融合基因質粒體外瞬時轉染和體內接種試驗表明表達的融合蛋白可以被EalA多克隆抗體和3-1E多克隆抗體檢測出來,進一步證明了融合基因表達的蛋白具有兩段基因各自的生物活性,為后續(xù)動物免疫試驗提供了理論基礎。
　　 動物免疫試驗分為7個組,即PBS組(PBS對照組)、PVAX組(PVAX空質粒免疫組)、IL-18組(PVAX-IL-18真核質粒免疫組)、3-1E組(PVAX-3-1E真核質粒免疫組)、

4、EalA組(PVAX-EalA真核質粒免疫組)、LK組(PVAX-3-1E-linker-EalA融合基因真核質粒免疫組),以及LK+組(PVAX-3-1E-linker-EalA融合基因真核質粒和PVAX-IL-18真核質粒免疫組)。利用淋巴細胞增殖試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗、免疫器官指數(shù)對不同處理組雛雞的各項免疫指標進行檢測,評價真核表達質粒的免疫效應。結果表明,5組疫苗免疫組各日齡雛雞的免疫指標均高于組對照組,其中有ChIL-18、L

5、K、LK+三組免疫組免疫應答反應尤為突出。其中T、B淋巴細胞增殖功能、外周血液中抗3-1E和EalA特異性抗體水平以及免疫器官指數(shù)與對照組相比較都有明顯的提高,而且以LK+組最為顯著。
　　 綜上所述,3-1E與EalA融合基因真核表達質粒不但能刺激機體的細胞免疫應答,而且能夠刺激機體體液免疫應答,ChIL-18基因可以提高3-1E與EalA融合基因真核表達質粒刺激機體產生細胞免疫應答和體液免疫應答能力,進而提高機體抵抗球蟲攻擊