田鼠巴貝蟲病分子調查及其診斷抗原高通量篩選.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩95頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、目的:
  對中緬邊境地區(qū)發(fā)熱人群田鼠巴貝蟲(Babesia microti)感染情況調查及田鼠巴貝蟲病相關診斷抗原候選分子高通量篩選鑒定。
  方法:
  1)首先對2014年6~8月期間在中緬邊境地區(qū)收集的200份排除瘧疾感染發(fā)熱病人的全血血樣提取DNA,然后應用基于田鼠巴貝蟲18srRNA序列與微管蛋白序列設計引物進行巢式PCR擴增和測序分析鑒定田鼠巴貝蟲感染情況。
  2)基于田鼠巴貝蟲公共數據庫篩選分泌

2、蛋白、重復序列和PiroplasmaDB公開數據庫中部分田鼠巴貝蟲與惡性瘧原蟲、牛巴貝蟲同源序列篩選構建本地數據庫,從田鼠巴貝蟲(Babesia microti ATCC PRA-99TM)感染的BALB/c小鼠血液中提取田鼠巴貝蟲RNA經反轉錄為cDNA,以田鼠巴貝蟲cDNA為模板擴增目的基因片段。利用無縫克隆技術連接目的基因片段的擴增產物和質粒載體pEU-His,經過重組質粒的鑒定,最后獲得含有目的基因片段的表達質粒。利用試劑盒提取

3、重組質粒后,采用麥胚無細胞蛋白表達體系進行表達,用western-blot技術分析鑒定出表達正確的蛋白。通過蛋白芯片技術用不同感染時期鼠血清對表達正確的蛋白進行高通量篩選。
  結果:
  1)在200份發(fā)熱病人巢式PCR檢測有2份病人全血經兩種巢式PCR和測序分析鑒定為田鼠巴貝蟲感染,并經進化序列分析為人獸共患型田鼠巴貝蟲株。
  2)篩選222個目的基因片段構建本地數據庫,PCR成功擴增了215個片段,無縫克隆成功

4、構建了186個重組質粒,麥胚無細胞蛋白合成系統(tǒng)成功表達了167個重組蛋白。以感染田鼠巴貝蟲的BALB/c小鼠不同時期血清為抗體,利用蛋白芯片技術從167個重組抗原中篩選出10個重組抗原,分別是:BmSP44、BmRS8、BmRS21、BmRS28、BmRS29、BmHP3
  3、BmHP37、BmHP41、BmHP42和BmHP43。
  結論:
  在我國云南省中緬邊境地區(qū)存在可感染人和其他哺乳動物的田鼠巴貝蟲;用

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論