1、目的：通過(guò)觀察植物雌激素α玉米赤霉醇（α-ZAL）對(duì)體外培養(yǎng)新生大鼠顱骨成骨細(xì)胞的作用，研究植物雌激素α-玉米赤霉醇對(duì)大鼠成骨細(xì)胞增殖、分化及蛋白表達(dá)的影響，探討植物雌激素α-玉米赤霉醇在骨代謝中的作用機(jī)理，以期為骨質(zhì)疏松防治藥物的研究開(kāi)闊思路。
　　 方法：1.采用二次酶消化法分離培養(yǎng)新生（24h）SD 乳鼠顱蓋骨成骨細(xì)胞。2.應(yīng)用鈣鈷法堿性磷酸酶(ALP)染色和茜素紅礦化結(jié)節(jié)染色來(lái)鑒定成骨細(xì)胞。3.應(yīng)用噻唑蘭(MTT)法測(cè)定

2、植物雌激素α-玉米赤霉醇對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響。4.采用對(duì)硝基苯二鈉基質(zhì)動(dòng)力學(xué)法檢測(cè)了24 h和48h 成骨細(xì)胞堿性磷酸酶活性的改變。5.采用免疫組化法觀察α玉米赤霉醇對(duì)體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞的Bax、Bcl-2表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：1.細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察：剛接種的原代成骨細(xì)胞呈球形，24h內(nèi)存活細(xì)胞已沉降貼壁，培養(yǎng)第2天能夠完全展開(kāi)，呈三角形、梭形，核明顯增大；傳代培養(yǎng)5天，細(xì)胞形態(tài)可見(jiàn)多樣化，胞漿豐富，向外伸展，伸出多個(gè)偽足，與周?chē)?/p>

3、細(xì)胞的偽足相互連結(jié)，細(xì)胞半融合；培養(yǎng)一周左右，可見(jiàn)長(zhǎng)索形、多角形、條索形，匯合時(shí)細(xì)胞呈鋪路石狀，可重疊生長(zhǎng)。2.成骨細(xì)胞的鑒定：ALP 染色可見(jiàn)90％細(xì)胞染色陽(yáng)性,胞質(zhì)中出現(xiàn)灰黑色顆粒或塊狀沉積，礦化結(jié)節(jié)呈橘紅色結(jié)節(jié)、邊界清晰，可證明為成骨細(xì)胞。3.對(duì)大鼠成骨細(xì)胞增殖的影響：大鼠成骨細(xì)胞在含有不同濃度（10-5mol/L～10-10mol/L）α玉米赤霉醇以及含有10-10mol/L的雌二醇和無(wú)藥物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h后，與E2組比較，

4、α-ZAl10-7mol/L、α-ZAl10-10mol/L 這兩種濃度差異無(wú)顯著性（P＞0.05），說(shuō)明這兩種濃度有促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖的作用4.對(duì)大鼠成骨細(xì)胞外堿性磷酸酶活性的影響：與正常組比較，三組均有顯著性差異，與E2組比較，α-ZAl10-7mol/L、α-ZAl10-10mol/L 這兩種濃度差異無(wú)顯著性（P＞0.05），說(shuō)明這兩種濃度均可以促進(jìn)成骨細(xì)胞分泌ALP。在促進(jìn)成骨細(xì)胞分泌ALP的過(guò)程中，隨著用藥天數(shù)的增加，ALP 含