乳酸菌表面蛋白對(duì)免疫細(xì)胞體外激活及其過(guò)敏緩解效應(yīng)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、乳酸菌是人和動(dòng)物消化道和生殖道中廣泛分布的菌群,從中分離的許多菌株已被廣泛用于益生菌制劑和發(fā)酵食品的生產(chǎn)過(guò)程中,在維持胃腸道正常功能、抑制病原菌入侵、預(yù)防腹瀉以及食物過(guò)敏等方面具有獨(dú)特的生理作用。乳酸菌表面存在200多種蛋白,在與宿主相互作用中發(fā)揮了重要作用,其中部分蛋白因子被發(fā)現(xiàn)是對(duì)宿主粘附和免疫調(diào)節(jié)作用的重要物質(zhì)基礎(chǔ),但大多數(shù)蛋白的功能尚不清楚。深入研究和科學(xué)評(píng)價(jià)乳酸菌表面蛋白的功能對(duì)于增加乳酸菌及其相關(guān)產(chǎn)品的益生功能以及篩選新型菌

2、株和功能因子具有重要意義。本文應(yīng)用腸上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、脾細(xì)胞以及致敏肥大細(xì)胞作為模型研究了不同乳酸菌菌株的表面蛋白在粘附、誘導(dǎo)增殖以及緩解過(guò)敏效應(yīng)中的作用,以期為系統(tǒng)地研究表面蛋白的功能并開(kāi)發(fā)其應(yīng)用價(jià)值提供依據(jù),主要研究工作及結(jié)果如下:
  應(yīng)用5 mol L-1氯化鋰結(jié)合鹽酸胍提取了植物乳桿菌LpYZU09、干酪乳桿菌LcYZU02、鼠李糖乳桿菌LrGG、發(fā)酵乳桿菌LfYZU15及戊糖片球菌PpYZU32的表面蛋白,分析了提取

3、物對(duì)乳酸菌對(duì)鼠腸上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和脾細(xì)胞的粘附抑制作用。結(jié)果顯示表面蛋白對(duì)3種細(xì)胞粘附菌體均具有顯著抑制效應(yīng),抑制作用具有細(xì)胞和菌株差異性,其中菌株LrGG表面蛋白對(duì)巨噬細(xì)胞粘附5種菌體普遍顯示了較強(qiáng)的抑制作用,抑制率為38.7%~76.0%。結(jié)果表明乳酸菌表面的蛋白類因子在粘附腸上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、脾細(xì)胞中發(fā)揮了重要作用。
  應(yīng)用MTT方法測(cè)定了不同菌株表面蛋白對(duì)鼠腸上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和脾細(xì)胞的誘導(dǎo)增殖效應(yīng),結(jié)果顯示不同菌株

4、表面蛋白對(duì)腸上皮細(xì)胞的誘導(dǎo)增殖指數(shù)為0.05~0.35,對(duì)巨噬細(xì)胞為0.05~0.42,對(duì)脾細(xì)胞為0.02~0.40,誘導(dǎo)效應(yīng)具有菌株和劑量依賴性,菌株LrGG的誘導(dǎo)增殖指數(shù)顯著高于其他四種,表明乳酸菌表面的蛋白類因子在激活腸上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、脾細(xì)胞中發(fā)揮了重要作用。
  應(yīng)用BALB/c小鼠的卵蛋白致敏血清通過(guò)腹腔注射獲得致敏肥大細(xì)胞,并建立體外細(xì)胞過(guò)敏模型,測(cè)定了不同乳酸菌表面蛋白對(duì)肥大細(xì)胞脫顆粒的抑制作用。結(jié)果小鼠的卵蛋白

5、致敏血清中的IgE濃度在第14 d最高為4.58μg/rnL,獲得的肥大細(xì)胞的純度為87.60%,乳酸菌表面蛋白提取物(45μg/mL)對(duì)肥大細(xì)胞的存活沒(méi)有影響;卵蛋白(1.0 mg/ml)誘導(dǎo)致敏肥大細(xì)胞脫顆粒率為71.7±7.6%,顯著高于對(duì)照組(未誘導(dǎo)組,19.3±4.9%);不同乳酸菌表面蛋白對(duì)特異性激活的肥大細(xì)胞脫顆粒具有抑制作用,抑制率范圍為7.5~35.4%,但效應(yīng)具有明顯的菌株差異性,植物乳桿菌LpYZU09、鼠李糖乳桿

6、菌LrGG和發(fā)酵乳桿菌LfYZU15表面蛋白的脫顆粒抑制率范圍在22.3~35.4%,顯著高于干酪乳桿菌LcYZU02和戊糖片球菌PpYZU32的抑制率(7.5~15.8%);蛋白作用劑量范圍內(nèi)對(duì)肥大細(xì)胞的脫顆粒緩解程度不存在明顯的劑量效應(yīng),均能極顯著的抑制IgE介導(dǎo)的肥大細(xì)胞脫顆粒率(P<0.01),表明免疫激活的肥大細(xì)胞對(duì)乳酸菌表面蛋白極為敏感。
  應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定表面蛋白與體外肥大細(xì)胞作用過(guò)程中組胺釋放量。結(jié)果顯示:

7、不同表面蛋白干預(yù)后,肥大細(xì)胞的釋放組胺的范圍在71.5~104.2μg/L,相對(duì)于對(duì)照組(PBS組,107.9μg/L),不同菌株和劑量的表面蛋白對(duì)肥大細(xì)胞組胺釋放的抑制率范圍為3.4~33.7%;與脫顆粒緩解程度具有相關(guān)性。表面蛋白對(duì)免疫激活肥大細(xì)胞釋放組胺的緩解效應(yīng)也存在菌株差異性,緩解組胺釋放能力較強(qiáng)的表面蛋白分別為SPLp、SPLr和SPLf(抑制率在22.2~33.7%之間),SPLp(0.45μg/mL)能夠極顯著的抑制組胺

8、的釋放(P<0.01),抑制率最高達(dá)到33.7%,SPLr和SPLf可以顯著抑制組胺的釋放(P<0.05),組胺釋放量顯著低于對(duì)照組(10μg/mL B SA組,102.8±5.2μg/L)。在所測(cè)定的表面蛋白劑量范圍內(nèi),組胺抑制率沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯劑量效應(yīng)。戊糖片球菌PpYZU32表面蛋白(SPPp)和干酪乳桿菌LcYZU02表面蛋白(SPLc),雖然在一定程度上抑制肥大細(xì)胞中組胺的釋放(抑制率為3.4~8.3%),但與對(duì)照組(PBS組和B

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