1、T-2毒素和黃曲霉毒素均是由真菌產生的有毒次級代謝產物，在自然界中分布廣泛，成為花生、玉米、大豆、大米等農作物的主要污染物，嚴重影響農產品的產量及其質量。它們不僅能夠對人、畜產生免疫毒性、細胞毒性，而且還有較強的致癌作用，其中黃曲霉毒素被認為是迄今發(fā)現的最強致癌物質之一?；谡婢舅貙θ诵蟮奈：?，很多國家對農產品中真菌毒素的含量都制定了限量標準，并將此作為貿易壁壘的手段之一。隨著人們生活質量的不斷提高，人們對日益突出的食品安全問題看得越

2、來越重，要求也越來越高，食品安全問題更關系到社會穩(wěn)定與和諧。如何突破國際貿易壁壘，減少經濟損失，讓人們吃上安全放心的食品成為亟待解決的問題，而研究建立真菌毒素的免疫分析技術是解決這一問題的重要手段。
　　抗體是免疫分析技術的核心，抗體的特異性和靈敏度直接決定著免疫分析技術的好壞。以往的免疫分析檢測技術大都是基于單克隆抗體和多克隆抗體，雜交瘤細胞能夠在體外無限繁殖，只要細胞株不發(fā)生基因突變，就可以通過培養(yǎng)無限的生產高特異性、高均一性

3、的單克隆抗體抗體，但是目前已報道的T-2單克隆抗體的靈敏度不夠高、特異性不強，還不能滿足檢測需求，因此研制更高靈敏度的T-2單克隆抗體勢在必行。
　　近年來，納米抗體逐漸走進人們的視野，它以耐有機溶劑、耐高溫、耐酸堿性等諸多優(yōu)點而備受人們期待，基于納米抗體的檢測技術也應運而生，開創(chuàng)一個全新的研究領域。隨著對納米抗體的需求量的增加，如何實現納米抗體的批量生產必將成為納米抗體技術發(fā)展中至關重要的一環(huán)。
　　針對上述問題，本研究的

4、內容和創(chuàng)新點如下:
　　1.研制出高靈敏度的抗T-2毒素的單克隆抗體。首先將T-2毒素與琥珀酸通過琥珀酸酐法反應生成T-2HS，再通過活潑酯法，將T-2毒素半抗原分別與牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)共價偶聯，合成出T-2毒素人工抗原T-2HS-BSA和T2HS-OVA，以T-2HS-BSA作為免疫原，免疫Balb/c小鼠，取其脾細胞與相應比例的小鼠骨髓瘤細胞進行融合，采用半固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，并通過兩步篩選法進行篩選分

5、泌抗T2毒素抗體的雜交瘤細胞株。用間接競爭法檢測單克隆抗體的特異性，共獲得4株性能良好的單克隆細胞株，分別是1D6、2A8、2C5和4G3。其中2C5所分泌抗體的靈敏度(IC50)為0.13ng/mL，分泌抗體的性能穩(wěn)定，特異性強，與HT2的交叉反應率為4％，與FB1、DON、ZEN無交叉反應。與已有報道相比，2C5是目前最好的抗體。
　　2.利用2C5抗體研究建立了間接競爭ELISA檢測方法，最低檢測限為0.015ng/mL，檢

6、測范圍(IC20～IC80)為0.05～57.6 ng/mL，該方法對大豆、玉米、花生等糧油產品的檢測范圍為0.5576μ g/kg，在線性范圍內加標回收率為93.5％～107.5％，本研究建立的檢測方法可用于大豆、玉米、花生等多種糧油產品中T-2毒素的檢測。
　　3.研究建立了黃曲霉毒素B1納米抗體批量制備技術。利用本實驗室已獲得的菌株，通過對納米抗體表達的最適誘導溫度、誘導時間、誘導劑濃度等條件的優(yōu)化，探明最佳誘導溫度為33℃

7、，最佳誘導時間為10h，最佳誘導劑濃度為1mmol/L。建立了基于發(fā)酵罐的納米抗體批量生產技術。批量生產的黃曲霉毒素B1的納米抗體靈敏度(IC50)為0.75ng/mL，特異性良好，這與何婷微量制備的納米抗體相比，抗體主要技術參數基本保持一致，而抗體的產量得到了大大提高。
　　4.研制出納米抗體免疫親和柱。利用制備的納米抗體，通過參照傳統(tǒng)親和柱的制備方法，研制出了新型的免疫親和柱，親和柱的柱容量為200ng，通過與傳統(tǒng)免疫親和柱的