1、擬除蟲菊酯類農藥是目前使用廣泛的有機農藥之一。3-苯氧基苯甲酸是擬除蟲菊酯類農藥降解的中間產物，其生物學毒性和遷移率較菊酯類農藥大。我國農業(yè)生產對擬除蟲菊酯農藥的依賴程度與日俱增，其直接結果是導致由該農藥殘留及其降解產物所產生的環(huán)境問題日益嚴重，因此，擬除蟲菊酯類農藥及其降解產物的生物降解已成為環(huán)境生物技術領域的研究熱點。
　　 本研究以課題組前期克隆得到的擬除蟲菊酯類農藥降解基因estA(genbank:DQ906143)為出

2、發(fā)基因，構建誘導表達系統(tǒng)，獲得可溶性蛋白，并通過優(yōu)化發(fā)酵條件，獲得具有實際應用價值相關應用參數。對于探索本實驗室前期篩選所得的擬除蟲菊酯降解菌4-D對該農藥降解產物3-苯氧基苯甲酸降解性能的研究，為后期獲得3-PBA降解相關基因及構建多降解酶基因表達載體及工程菌提供可行性論證。研究結果表明:
　　 成功構建重組表達載體pMAL-c2X-estA質粒并轉化至宿主菌BL21(DE3)，獲得酯酶estA基因誘導表達系統(tǒng);通過SDS-P

3、AGE凝膠電泳、以α-乙酸萘酯為底物的酶活性檢測及Westernblot方法，確認外源蛋白EstA在大腸桿菌宿主菌中成功表達并具有酯酶活性;在無Ca2+參與誘導的情況下可溶性表達也能進行;菌體細胞液中含有可溶性EstA蛋白及部分不可溶的包涵體蛋白，后者為誘導表達條件的優(yōu)化，奠定了基礎;
　　 含pMAL-c2X-estA質粒的重組基因工程菌可溶性原核表達誘導條件的優(yōu)化實驗表明，其最佳誘導條件是:Ca2+濃度1mM，誘導初始OD6

4、00為0.7，誘導劑IPTG濃度0.1mM，誘導時pH為7，最佳誘導溫度為26℃，誘導時間17.5h。優(yōu)化后的酯酶酶活較未優(yōu)化前可提高近2倍;
　　 3-苯氧基苯甲酸的降解實驗表明:在使用高效液相色譜進行3-PBA檢測的過程中，直接采用乙腈作為提取液，與樣品以1∶1比例混合均勻，經過濾處理直接上機檢測，所得結果符合線性關系，且重復性好;實驗室前期分離得到的一株可降解擬除蟲菊酯農藥的4-D菌株在12d內對250mg/L的3-苯氧基