抗伏馬菌素B1單克隆抗體的制備及其ELISA檢測(cè)試劑盒的研發(fā).pdf_第1頁(yè)
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1、伏馬菌素B1(FB1)是由串珠鐮刀菌(Fusarium moniliforme)產(chǎn)生且具有肺毒性、神經(jīng)毒性、免疫系統(tǒng)毒性、致癌性等多種毒性的一類真菌毒素。FB1是一種污染范圍較廣的真菌毒素,主要污染玉米及其制品,也可污染小麥、稻米等糧食及其制品。由于FB1分布廣泛且毒性較大,且對(duì)人類以及動(dòng)物都能產(chǎn)生毒性,因此它在食品安全中越來(lái)越受到人們關(guān)注。國(guó)際癌癥研究中心(IARC)已經(jīng)把FB1確定為2B類致癌物(有可能使人類誘發(fā)癌癥)。目前,對(duì) F

2、B1的檢測(cè)主要建立在儀器測(cè)量上,由于儀器設(shè)備價(jià)格昂貴且操作復(fù)雜,因此有一定局限性。以單克隆抗體為基礎(chǔ)的免疫學(xué)檢測(cè)方法不僅克服了上述難題,而且靈敏度更高,有利于推廣普及。
  本研究利用實(shí)驗(yàn)室保存的能分泌抗FB1單克隆抗體的細(xì)胞株4G5,進(jìn)一步篩選出能穩(wěn)定分泌單抗且效價(jià)更高的細(xì)胞株4G5-A4,并制備純化出抗FB1單克隆抗體。抗體純化前蛋白濃度為12.58 mg/mL,純化后抗體濃度為1.62 mg/mL,IgG回收率為25.63%

3、,亞類為IgG2b,親和力為1.28×108 L/mol;單抗與AFB1、CIT、CTX、DON沒(méi)有交叉反應(yīng),與T2毒素有輕微的交叉反應(yīng)現(xiàn)象。本研究獲得的抗FB1單克隆抗體品種優(yōu)良,為進(jìn)一步建立FB1的ELISA檢測(cè)技術(shù)奠定了基礎(chǔ)。
  利用所獲得的抗FB1單克隆抗體,建立間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法,優(yōu)化參數(shù)條件。其中抗原包被濃度0.05μg/mL,一抗稀釋度為1:4000。該檢測(cè)方法對(duì)FB1的檢測(cè)線性范圍為1.29~804.38

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