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文檔簡介
1、隨著近年來傳感器技術(shù)的迅速發(fā)展,DNA生物傳感器因具有電極制作簡便、使用壽命長、重現(xiàn)性好、靈敏度高、成本低、易于實現(xiàn)微型化等優(yōu)點,在臨床醫(yī)學檢驗、遺傳工程、藥物作用機理、新藥篩選、環(huán)境監(jiān)測和食品工程等領(lǐng)域已得到廣泛地研究與應用.
本文構(gòu)建了兩種新型DNA電化學生物傳感器分別對特定序列的DNA及其損傷情況和地高辛抗體進行檢測。
DNA作為儲存和傳遞遺傳信息的生物大分子,其完整性對生物體來說具有至關(guān)重要的作用。本文利用外
2、切酶Ⅲ對雙鏈的水解作用和二茂鐵良好的傳遞電子的能力,設(shè)計了一種方便,快捷并且靈敏度很高的DNA電化學生物傳感器來檢測特定序列的DNA及其損傷情況。首先將二茂鐵標記的探針DNA與捕獲探針DNA1的一段在雜交液中雜交形成雙鏈。當目標DNA出現(xiàn)之后,與捕獲探針DNA1的另一段形成雙鏈。由于雙鏈中目標DNA和探針DNA的3'端都突出,捕獲探針的3'端為平末端,因外切酶Ⅲ作用于雙鏈的3'平和凹末端,所以捕獲探針DNA1被水解掉。二茂鐵修飾的探針D
3、NA和目標DNA從雙鏈中釋放,使目標DNA得以循環(huán)。被修飾在電極上的捕獲探針DNA2將釋放出來的探針DNA捕獲雜交,在電極表面形成雙鏈,二茂鐵分子被拉近到電極表面產(chǎn)生很強的電化學信號。通過電化學信號的不同間接的檢測目標DNA及其損傷。外切酶Ⅲ促進了目標DNA的循環(huán),提高了檢測限。這種方法具有很高的靈敏度和特異性。
特異性抗體檢測是協(xié)助臨床診斷,在某些疾病中亦是觀察療效及預后的一個指標。因此特異性抗體的檢測具有特殊的、重要的意義
4、。本文以二茂鐵分子作為電化學標記物,利用銀離子的作用在電極表面形成DNA的三鏈構(gòu)建了一種新型的靈敏檢測地高辛抗體的DNA電化學生物傳感器。該方法以金電極作為基體電極,將二茂鐵標記的發(fā)夾狀寡核苷酸鏈通過金硫鍵共價結(jié)合的方式修飾在金電極表面。發(fā)卡結(jié)構(gòu)將二茂鐵分子拉近到電極表面產(chǎn)生電化學信號。在銀離子的作用下,將地高辛抗原標記的寡核苷酸鏈與二茂鐵標記的發(fā)卡狀寡核苷酸鏈的環(huán)狀部分結(jié)合形成三連,發(fā)卡結(jié)構(gòu)被打開,二茂鐵分子遠離電極,使得產(chǎn)生的電流信
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