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文檔簡介
1、生命體內龐大的血管網(wǎng)絡為細胞供應充足的氧氣和養(yǎng)分是實現(xiàn)細胞代謝和功能的關鍵。血管內皮細胞作為血管結構的重要組成部分之一,具有調節(jié)細胞活性分子表達、血管新生以及血管滲透性的功能。因此,仿生構建具有調節(jié)血管內皮細胞粘附、增殖、生存的細胞外基質(ECM),是解決人工構建功能性組織或器官時缺乏充足血管系統(tǒng)問題的方法之一。
本文利用基因重組技術,分別構建了含有血管內皮細胞生長因子(VEGF)、免疫球蛋白IgG的Fc段基因序列的重組質粒p
2、cDNA3.1-VEGF-Fc和含有VEGF、MMP-2特異內切底物和Fc段基因序列的重組質粒pcDNA3.1-VEGF-SMP-Fc。用人胚胎腎293F細胞真核體系表達融合蛋白VEGF-Fc和蛋白酶敏感型融合蛋白VEGF-SMP-Fc,且經(jīng)蛋白質A親和層析色譜柱純化后,兩種融合蛋白純度均達到85%以上。再分別將純化的融合蛋白物理吸附固定在疏水聚苯乙烯材料表面,形成生長因子型人工ECM和蛋白酶敏感型人工ECM。
結果表明,融合
3、蛋白VEGF-Fc構建的人工ECM顯著性提高人臍帶血管內皮細胞(HUVECs)在疏水材料表面的粘附能力,并且在72h內有效促進HUVECs增殖。通過細胞骨架染色,可以明顯看出在融合蛋白VEGF-Fc基質表面生長的內皮細胞誘導肌動蛋白纖維重新組合形成應力纖維。且生長因子型人工ECM能有效調節(jié)內皮細胞功能性分子的表達,在基質表面快速形成內皮層,進而調節(jié)血管的形成和滲透性。
此外,與商品化VEGF-165的半衰期(約12h)相比,融
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