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文檔簡介
1、輔酶Q10(CoQ10)作為細胞有氧呼吸鏈中的一個重要遞氫體,廣泛應用于醫(yī)藥和食品行業(yè)。近年來,CoQ10作為一種輔助藥物,在治療心臟衰竭方面,使用比例逐年增加,因此對CoQ10的需求也不斷增長。對產CoQ10微生物的開發(fā)利用也愈發(fā)重要。本文以類球紅細菌(Rhodobacter sphaeroides)為出發(fā)菌,研究了該菌的誘變選育、培養(yǎng)基優(yōu)化和補料分批發(fā)酵工藝。
1.對比皂化法、超聲波破碎法、反復凍融法、酸熱法和酸熱輔助超聲
2、法對CoQ10提取效果的影響,確定了酸熱輔助超聲破胞方法的可行性。并通過單因素實驗、正交法實驗確定其最佳提取工藝條件。酸熱輔助超聲法提取類球紅細菌中CoQ10最優(yōu)的提取條件是加入300μL的鹽酸、80℃、400w超聲處理20min。此時,CoQ10得率為3.738mg/g。
2.以自然篩選獲得的R.sp1-11為出發(fā)菌株,經過紫外-LiCl、NTG結合VK3、NaN3和PHB復合抗性誘變,獲得一株遺傳性狀良好的CoQ10高產菌
3、株,其產量為71.23mg/L,比出發(fā)菌株提高了132.17%。通過單因素實驗對R.sp3-7菌株發(fā)酵條件進行優(yōu)化,得到最優(yōu)條件為:32℃、初始pH為7.0、接種量8%及裝液量為40mL/250mL,CoQ10產量為82.70mg/L。
3.對R.sp3-7生產CoQ10的發(fā)酵培養(yǎng)基進行優(yōu)化,首先通過單因素篩選確定了培養(yǎng)基最佳碳源、氮源和需添加的金屬離子。通過Plackett-Burman設計對培養(yǎng)基中的9種成分進行篩選,獲得
4、影響發(fā)酵的3個重要成分:葡萄糖、玉米漿干粉和硫酸鎂,再采用Box-Behnken響應面試驗對上述三種成分進行優(yōu)化,獲得最佳濃度:葡萄糖36.9g/L、玉米漿干粉5.3g/L、MgS0414.4g/L。優(yōu)化后CoQ10產量達到135.20mg/L,比優(yōu)化前提高了68.62%。
4.在5L發(fā)酵罐中考察了pH、溶氧(DO)水平對CoQ10合成的影響,結果發(fā)現(xiàn)CoQ10合成的最適pH為6.8。此時,CoQ10產量為60.29mg/L,
5、生物量為16.32g/L。當發(fā)酵開始24h后,通過控制適當?shù)耐饬亢蛿嚢杷俣葋硎谷苎蹙S持1%。與未改變溶氧相比,CoQ10含量明顯提高,達到82.67mg/L,提高了37.11%。而菌體生物量最高為15.49g/L,降低了4.5%。
5.在補料分批發(fā)酵過程中,控制葡萄糖濃度為10g/L時,有利于CoQ10合成,CoQ10產量最高為209.4mg/L。通過實驗分析得出在維持葡萄糖濃度為10g/L時,分別在24h、32h、48h、
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