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文檔簡介
1、高速逆流色譜(HSCCC)是一項不需固體載體即可實現(xiàn)連續(xù)液液分配的技術,廣泛應用于天然產物的制備分離方面。但日前為止,多數(shù)HSCCC儀器分離時間較長,因此有學者提出了閃式逆流色譜(flash counter current chromatography,F(xiàn)CCC)概念。在閃式逆流色譜中,流動相的流速應大于等于螺旋管徑值的平方。FCCC儀器的螺旋管長度通常小于150 m,分離時間小于5h,因此該技術特別適合放大進行工廠化分離。
2、本文主要包括三方面的內容:①大容量三柱串聯(lián)型高速逆流色譜儀的研制與測試;②FCCC技術結合大孔吸附樹脂柱層析技術快速制備EC;③茶粗提物巾微量成分的FCCC富集與分離制備及其結構解析。
首先,研制了大容量三柱串聯(lián)型高速逆流色譜儀樣機一臺,該樣機配有兩種不同系列型號的色譜柱:一種螺旋管的內徑為10mm,有效柱容積為12L;另一種螺旋管內徑為12 mm,有效拄容積為15L。樣機穩(wěn)定性測試結果理想。對于石油醚-乙酸乙酯-水系統(tǒng),60
3、0 r/min即可取得滿意的保留率。在保證分離度的前提下,12L柱容積色譜柱的最高流速為150 mL/min,15 L柱容積色譜柱的最高流速為180mL/min。
其次,就該樣機的實際分離純化能力進行了試驗,將該樣機應用于FCCC分離純化茶多酚中的ECG。在每次分離中,200 g樣品溶解于1600 mL流動相中進樣。12L系列色譜柱得到含有35 gECG的水溶液7.5L,15L系列色譜柱得到含有40 g ECG的水溶液9L。隨
4、后,ECG被單寧酶酶解為EC與G,利用大孔樹脂柱對ECG酶解液進行分離純化,共得到EC單體52 g,純度為99.1%。該樣機有望應用于天然產物的工廠化分離中。
第三,采用TBME-水(1∶1,v/v)系統(tǒng),利用該樣機對茶多酚樣品中的微量成分進行富集分離,得到Ⅰ-Ⅳ四種組分。組分Ⅰ經(jīng)制備高效液相色譜純化后,得到化合物A、B、C、D、E、F,其中化合物A、B和C為單體成分,經(jīng)質譜、1D-NMR與2D-NMR結構鑒定后,確定化合物A
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