1、文昌魚（amphioxus或lancelet）隸屬脊索動物門(Phylum Chordata)頭索動物亞門（Subphylum Cephalochordata），在脊椎動物的演化過程中扮演非常重要的角色。Pax4/6屬于Pax基因家族成員，該家族所編碼的蛋白是一類在后口動物中均十分保守的轉錄因子。
　　 本文對白氏文昌魚（Branchiostoma belcheri）Pax4/6基因進行克隆，并確定該基因至少存在3種轉錄本(Bb

2、Pax4/6-AP1～3)，其區(qū)別在于5' UTR以及N端的若干個氨基酸序列，形成的原因是選擇性啟動子的使用。在研究3種轉錄本表達模式之前，我們首先對BbPax4/6整體表達情況進行研究，通過實時熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)該基因從神經(jīng)胚早期才開始出現(xiàn)微弱表達，在神經(jīng)胚中期達到最高之后其表達量逐漸下降。原位雜交結果顯示該基因的表達區(qū)域特異地出現(xiàn)于胚體最前端、神經(jīng)管前端位點以及口前窩（將來發(fā)育成哈氏窩，與脊椎動物腺垂體同源），推測BbPax4/6可

3、能與嗅覺相關細胞、前眼（與脊椎動物對眼同源）以及口前窩的發(fā)育相關，并且這些功能在文昌魚與脊椎動物中均十分保守。
　　 實時熒光定量PCR結果顯示，BbPax4/6的3種轉錄本表達量與表達趨勢上存在差異，但是，整胚原位雜交的結果初步顯示，3種轉錄本均在胚體前端、神經(jīng)板（管）前端位點以及口前窩表達，并沒有出現(xiàn)表達區(qū)域的分化。分析原因可能是3種轉錄本確實均在這幾個表達區(qū)域起作用，同一區(qū)域中，各自的表達量可能存在著差異，但是通過整胚原位

4、雜交無法體現(xiàn)這些差異。此外，頭索動物文昌魚與脊椎動物有所不同，脊椎動物中許多復雜的器官（如兩側對稱的眼），在文昌魚內(nèi)也許只有若干個細胞與之同源（脊椎動物對眼的同源結構——文昌魚前眼僅由一個前端的色素眼點和與之相應的感光細胞以及一些神經(jīng)細胞組成），不過這些細胞之間仍然有分化。同一基因在這些細胞作用時，可能需要不同轉錄本來運作，但這些轉錄本可能只存在細胞與細胞之間的微小差別，這些差別可能無法通過整胚原位雜交來體現(xiàn)。
　　 我們針對B

5、bPax4/6設計了1條Morpholino(MO)與4條siRNA，利用顯微注射技術來實現(xiàn)對BbPax4/6基因抑制的研究。其中MO設計位置為轉錄本BbPax4/6-AP2翻譯起始位點上游-46bp～-22bp區(qū)域。通過對胚胎正常發(fā)育率的統(tǒng)計，我們發(fā)現(xiàn)注射過MO的實驗組與注射過control MO的對照組之間并不存在顯著性差異，因此我們推測不同轉錄本之間可能存在代償機制，使PAX4/6蛋白水平并未受到影響。此外，在3種轉錄本共有的保守