1、α-葡萄糖苷酶廣泛存在于自然界生物體內，種類繁多，性質各異。它是一種限制性水解酶，可從低聚糖類底物的非還原末端切開α-1,4糖苷鍵，釋放出葡萄糖，或將游離出的葡萄糖殘基轉移到另一糖類底物形成α-1，6糖苷鍵，從而得到非發(fā)酵性的低聚異麥芽糖或糖脂、糖肽等。
　　 Α-葡萄糖苷酶應用于生產低聚異麥芽糖，受到食品工業(yè)界的重視。但生產過程中的環(huán)境條件對酶活影響很大，因此耐熱α-葡萄糖苷酶成為研究的熱點之一。
　　 本實驗以非解朊

2、棲熱菌HG102 α-葡萄糖苷酶基因為模板進行PCR擴增α-葡萄糖苷酶基因，與表達載體pET28α(+)連接，轉入感受態(tài)細胞DH5α，篩選陽性重組體，酶切檢驗，然后把構建好的重組質粒轉入BL21(DE3)，經異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導表達。誘導后進行細胞超聲破碎，蛋白加熱沉淀和SDS-PAGE電泳分析。
　　 結果表明，PCR擴增得到1 900 bp左右的DNA片段，重組基因誘導表達后檢測得α-葡萄糖苷酶酶活，

3、蛋白經電泳分析顯示其相對分子質量約為65 KD，與理論值相符。經測序，克隆的基因序列與文獻一致。
　　 對取得的α-葡萄糖苷酶進行了酶學性質的初步研究，α-葡萄糖苷酶的最適pH為7.0，且在pH5.0-8.0條件下具有較好的穩(wěn)定性。Α-葡萄糖苷酶的最適溫度為85 ℃，在85 ℃條件下熱處理3 h后，α-葡萄糖苷酶的活性約為初始值的60％，具有較好的熱穩(wěn)定性。
　　 對重組菌進行了碳源、接種量、金屬離子、IPTG添加時間、

4、誘導時間單因素培養(yǎng)條件優(yōu)化，優(yōu)化結果：在LB液體培養(yǎng)基中添加1％甘油和0.01％的Mn2＋，接種量為6％，發(fā)酵培養(yǎng)2 h時，添加IPTG至終濃度為 1.2 mmol/L，誘導表達16 h，得到的α-葡萄糖苷酶酶活最高，最終酶活由初始的4.25 U/mL 提高到40.85 U/mL，提高了8.6倍。
　　 根據單因素優(yōu)化實驗結果，以α-葡萄糖苷酶酶活為指標，選取接種量、誘導劑添加時間及誘導培養(yǎng)時間為考察因素，設計三因素三水平的正交