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文檔簡介
1、共軛亞油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)是指一組具有位置和幾何異構(gòu)的十八碳共軛二烯酸的總稱。它廣泛存在于自然界中,在反芻動物的肉制品和乳制品中含量較多。動物和人體試驗已經(jīng)證實CLA具有諸多生理功能,主要包括抗癌、抗動脈粥樣硬化、降低膽固醇、降低體脂、減少脂肪沉積、調(diào)節(jié)骨組織代謝、強(qiáng)化機(jī)體免疫和抗糖尿病。
基于CLA的生理功能,營養(yǎng)學(xué)家們努力提高乳中CLA含量,但研究發(fā)現(xiàn),提高乳中CLA含量的同
2、時,卻導(dǎo)致奶牛乳脂降低綜合癥(MFD)。目前研究證實t10,c12-CLA可能是導(dǎo)致奶牛乳脂降低綜合癥(MFD)的主要原因,因此本試驗采用組織塊法體外培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細(xì)胞,探索c9,t11-CLA和t10,c12-CLA純品對乳腺細(xì)胞內(nèi)乳脂合成及相關(guān)基因mRNA轉(zhuǎn)錄的影響。在分子水平上,探討CLA對奶牛乳腺上皮細(xì)胞甘油三酯(TAG)含量及脂肪酸合成相關(guān)基因mRNA轉(zhuǎn)錄的影響。試驗結(jié)果表明:
(1)采用組織塊法實現(xiàn)了體外培養(yǎng)
3、出奶牛乳腺上皮細(xì)胞,細(xì)胞成活率較高,達(dá)到85%以上;經(jīng)過多次傳代和角蛋白18鑒定后,可得到純化的奶牛乳腺上皮細(xì)胞。測定乳腺上皮細(xì)胞的相關(guān)生物學(xué)性狀,試驗結(jié)果為細(xì)胞生長曲線呈“S”型,符合一般細(xì)胞生長規(guī)律:細(xì)胞群體倍增時間為32.18h;細(xì)胞接種存活率最高可達(dá)87%。
(2)試驗結(jié)果表明,c9,t11 CLA和t10,c12 CLA均可顯著降低乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)TAG含量(P<0.05),且t10,c12 CLA對TAG的抑制率
4、高于c9,t11 CLA。
(3)氣相色譜檢測CLA對細(xì)胞中脂肪酸組成的影響,結(jié)果表明150μmol/L c9,t11 CLA可顯著提高細(xì)胞內(nèi)單不飽和脂肪酸(MUFA)的比例(P<0.05),而50μmol/L c9,t11-CLA顯著增加細(xì)胞內(nèi)飽和脂肪酸(SFA)的比例(P<0.05);細(xì)胞內(nèi)MUFA的比例隨著t10,c12 CLA濃度的增加,呈顯著下降趨勢(P<0.05);兩種CLA對多不飽和脂肪酸(PUFA)的比例都
5、沒有顯著影響(P>0.05)。
(4)外源添加不同濃度的c9,t11-CLA與t10,c12-CLA直接作用于乳腺上皮細(xì)胞48 h,采用實時熒光定量PCR技術(shù),測定乳腺上皮細(xì)胞脂肪酸攝取與轉(zhuǎn)運(yùn)及甘油三酯合成相關(guān)基因mRNA的轉(zhuǎn)錄。試驗結(jié)果:與對照組相比,50~150μmol/L的c9,t11 CLA和t10,c12 CLA均顯著下調(diào)LPL基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平(P<0.05);50μmol/L c9,t11 CLA顯著下調(diào)
6、CD36基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平(P<0.05),150μmol/L c9,t11 CLA上調(diào)它的轉(zhuǎn)錄水平(P<0.05),CD36mRNA的轉(zhuǎn)錄水平隨t10,c12 CLA濃度增加呈顯著上升趨勢(P<0.05);150μmol/L c9,t11CLA和不同濃度的t10,c12 CLA均可顯著上調(diào)ACBP基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平(P<0.05);相比對照組,c9,t11 CLA與t10,c12 CLA均顯著下調(diào)FABP3基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水
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