1、目的:
　　觀察自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)小鼠白介素-17(interleukin-17，IL-17)和叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子3(forkhead transcription factor，F(xiàn)oxp3)在肝臟及腸道的表達(dá)情況，并在此基礎(chǔ)上探討AIH小鼠肝臟與腸道免疫損傷的關(guān)系以及輔助性T細(xì)胞17型(T help cell17，Th17)和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory CD4+

2、CD25+T cells，Tregs)在AIH發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:
　　1.造模雌性Balb/c小鼠6～7周齡，共12只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（6只）與對(duì)照組（6只）。實(shí)驗(yàn)組小鼠經(jīng)尾靜脈注射刀豆蛋白A(ConA)12.5mg/kg，每周一次，連續(xù)注射4周;對(duì)照組不作處理，兩組飼養(yǎng)環(huán)境相同。
　　2.4周后處死小鼠并取其肝臟及小腸組織標(biāo)本速凍，采用RT-PCR方法檢測(cè)IL-17及Foxp3在肝臟及小腸的表達(dá)情況;取肝

3、臟及小腸組織經(jīng)10％甲醛固定，常規(guī)包埋、切片后行蘇木精-伊紅(HE)染色病理檢查及免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)IL-17、Foxp3表達(dá)情況。
　　3.比較分析實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組肝臟及小腸組織IL-17、Foxp3表達(dá)情況，對(duì)比兩組小鼠肝臟及小腸炎癥情況，探討IL-17和Foxp3在AIH發(fā)病過(guò)程中的作用。
　　4.所有資料應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.成

4、功建立小鼠AIH實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)組小鼠肝臟HE染色顯示肝臟組織的炎癥反應(yīng)主要表現(xiàn)為大量的淋巴細(xì)胞以及少量的中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)，肝小葉結(jié)構(gòu)明顯破壞，出現(xiàn)肝細(xì)胞水腫、氣球樣變、點(diǎn)狀壞死甚至碎片狀壞死等表現(xiàn);而對(duì)照組肝組織結(jié)構(gòu)基本正常。
　　2.RT-PCR結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組小鼠肝組織中IL-17mRNA基因的表達(dá)明顯高于對(duì)照組(3.79±0.90 VS1.00±0.00)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);實(shí)驗(yàn)組小鼠肝組織中的Foxp3

5、mRNA基因的表達(dá)明顯低于對(duì)照組(0.13±0.03 VS1.00±0.00)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.RT-PCR結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組小鼠小腸組織中IL-17mRNA基因的表達(dá)明顯高于對(duì)照組(4.32±1.00 VS1.00±0.00)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);實(shí)驗(yàn)組小鼠小腸組織中的Foxp3mRNA基因的表達(dá)明顯低于對(duì)照組(0.21±0.13 VS1.00±0.00)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)

6、。
　　4.病理組織切片HE染色發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組小腸組織病理評(píng)分為中重度炎癥表現(xiàn)，對(duì)照組為無(wú)到輕度炎癥表現(xiàn)。
　　5.免疫組織化學(xué)染色顯示，實(shí)驗(yàn)組小鼠肝組織及小腸組織中IL-17的表達(dá)明顯上調(diào)，而對(duì)照組肝組織及小腸組織中沒(méi)有或僅有少量IL-17表達(dá)（肝中評(píng)分4.83±1.17 VS0.33±0.52;小腸中評(píng)分6.83±1.17 VS0.67±0.52）;對(duì)照組小鼠肝組織及小腸組織中可見(jiàn)散在分布的Foxp3表達(dá)，而實(shí)驗(yàn)組小鼠肝組

7、織及小腸組織中雖有大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，但表達(dá)的Foxp3明顯少于對(duì)照組，且染色變淺(肝中評(píng)分0.50±0.84 VS1.83±0.75;小腸中評(píng)分1.17±0.75 VS5.17±1.47)。
　　6.相關(guān)性分析結(jié)果顯示:肝組織和小腸組織中IL-17m RNA表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.903，P＜0.05);肝組織和小腸組織中Foxp3mRNA表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.0.973，P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.AIH小鼠

8、肝組織中IL-17表達(dá)顯著升高，提示Th17上調(diào);AIH小鼠肝組織中Foxp3表達(dá)顯著降低，提示Tregs下調(diào)。
　　2.AIH小鼠小腸組織中IL-17表達(dá)顯著升高，提示Th17上調(diào);AIH小鼠小腸組織中Foxp3表達(dá)顯著降低，提示Tregs下調(diào)。
　　3.AIH小鼠肝組織和小腸組織Th17上調(diào)趨勢(shì)一致，AIH小鼠肝組織和小腸組織Tregs下調(diào)趨勢(shì)一致，提示肝臟免疫損傷和腸道免疫損傷之間存在某種關(guān)系，但具體機(jī)制未明，有待進(jìn)一