1、慢性痛中,最嚴(yán)重、最難以控制的是由惡性腫瘤引起的疼痛,即癌痛。最常見(jiàn)的癌痛成因是乳腺癌、前列腺癌、肺癌和卵巢癌的骨轉(zhuǎn)移引起的疼痛。癌痛早期,由于腫瘤細(xì)胞和周圍組織炎癥細(xì)胞持續(xù)釋放神經(jīng)活性物質(zhì)可引起類似炎癥痛的反應(yīng);癌痛中、后期,由于腫瘤生長(zhǎng)引起的神經(jīng)浸潤(rùn)和壓迫,可出現(xiàn)類似神經(jīng)病理性疼痛的特征,這提示癌痛與炎癥痛和神經(jīng)病理性痛可能分享著某種類似的細(xì)胞和分子機(jī)制。
　　細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(Extracellular signal-re

2、gulated kinase,ERK)和p38是有絲裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族的兩個(gè)重要成員。它們?cè)诩顾璞辰巧窠?jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的激活是炎癥痛和神經(jīng)病理性疼痛產(chǎn)生痛覺(jué)敏化的重要機(jī)制。但在癌痛狀態(tài)下,ERK和p38在脊髓背角及其與膠質(zhì)激活相關(guān)的時(shí)間依賴性變化尚不清楚。因此,本論文在大鼠脛骨骨髓腔內(nèi)接種Walker256乳腺癌細(xì)胞建立的骨癌痛模型上,應(yīng)用形態(tài)學(xué)、免疫組織化

3、學(xué)、免疫印跡分析及行為學(xué)等方法,對(duì)骨癌痛發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中脊髓ERK/MAPK和p38/MAPK信號(hào)分子在不同細(xì)胞中激活的時(shí)間過(guò)程及其在骨癌痛中樞敏化產(chǎn)生中的可能機(jī)制進(jìn)行了初步探索。主要結(jié)果如下:
　　1.大鼠脛骨轉(zhuǎn)移性骨癌痛模型的建立
　　將Walker256大鼠乳腺癌細(xì)胞(4×104)接種至雌性Wistar大鼠脛骨骨髓腔內(nèi)。隨著腫瘤的生長(zhǎng),術(shù)側(cè)脛骨在接種后14和21天出現(xiàn)骨質(zhì)損傷和破壞;術(shù)側(cè)后肢表現(xiàn)出明顯的自發(fā)痛體征:雙側(cè)

4、后肢出現(xiàn)機(jī)械觸誘發(fā)痛及熱痛過(guò)敏,呈現(xiàn)出典型的鏡像痛特征。
　　2.脊髓膠質(zhì)細(xì)胞參與對(duì)大鼠轉(zhuǎn)移性骨癌痛的調(diào)制
　　接種腫瘤細(xì)胞14及21天后,雙側(cè)脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞均被大量激活:鞘內(nèi)給予膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑丙戊茶堿(propentofylline,PPF)和小膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑美滿霉素(minocycline)均可顯著抑制骨癌痛。
　　3.脊髓p38/MAPK和ERK/MAPK參與對(duì)大鼠轉(zhuǎn)移性骨癌痛的調(diào)制
　　

5、隨骨癌痛的發(fā)生和發(fā)展,雙側(cè)脊髓背角p38和ERK大量激活,在腫瘤細(xì)胞接種后3、7、14及21天,磷酸化的ERK(pERK)和p38(p-p38)在脊髓的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組;免疫熒光雙標(biāo)記結(jié)果顯示,腫瘤細(xì)胞接種后3天和7天,pERK主要表達(dá)在神經(jīng)元和小膠質(zhì)細(xì)胞,接種后14和21天,脊髓背角神經(jīng)元、小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞均可表達(dá)pERK;與ERK的激活稍有不同,p38在腫瘤細(xì)胞接種后3-21天在雙側(cè)脊髓背角神經(jīng)元和小膠質(zhì)細(xì)胞均有激活,

6、但骨癌痛早期主要分布在神經(jīng)元,而晚期主要分布在小膠質(zhì)細(xì)胞;行為學(xué)測(cè)試顯示,瘤細(xì)胞接種前2天預(yù)先腰穿給予p38抑制劑SB203580(10μg),并在術(shù)后每天一次,持續(xù)兩周,可以阻斷骨癌誘導(dǎo)的機(jī)械觸誘發(fā)痛形成;在腫瘤接種14天,行為痛敏已出現(xiàn)后,單次鞘內(nèi)給予p38抑制劑SB203580(10μg)和SB39063(100μg),或MEK(ERK的激酶)的抑制劑U0126(1、3μg)也可翻轉(zhuǎn)已形成的機(jī)械觸誘發(fā)痛;提示MAPK在骨癌痛的發(fā)展