1、乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。對(duì)于絕經(jīng)前乳腺癌患者，絕大多數(shù)的聯(lián)合化療可致暫時(shí)性或永久性絕經(jīng)。目前對(duì)于化療性閉經(jīng)(CIA)與乳腺癌預(yù)后間的關(guān)系仍然存在爭(zhēng)議，但過早絕經(jīng)所帶來的負(fù)面作用卻是顯而易見的。乳腺癌預(yù)后相對(duì)較好，經(jīng)有效的綜合治療后存活期逐漸延長(zhǎng)，但在乳腺癌存活者中，絕經(jīng)期癥狀是一個(gè)非常顯著的問題。因?yàn)榭焖龠M(jìn)入閉經(jīng)狀態(tài)，患者表現(xiàn)出的癥狀往往比正常絕經(jīng)時(shí)更明顯，帶來許多健康問題，明顯降低了乳腺癌患者的生活質(zhì)量。而目前對(duì)于這部分患者

2、，尚未有理想的推薦治療方法。 對(duì)于非乳腺癌患者來說，激素替代療法是緩解絕經(jīng)癥狀的一種有效方法。但基于對(duì)乳腺癌病因及治療的認(rèn)知，醫(yī)學(xué)界更多地認(rèn)為雌激素和/或孕激素治療對(duì)乳腺癌患者會(huì)引起較大的風(fēng)險(xiǎn)。因此，無論醫(yī)師或乳腺癌患者本人對(duì)進(jìn)行雌或孕激素治療都持非常謹(jǐn)慎的態(tài)度。而三苯氧胺(TAM)為雌激素受體調(diào)節(jié)劑，對(duì)有正常生理周期的絕經(jīng)前婦女是一種有效的抗腫瘤制劑。因此理論上聯(lián)合雌激素與三苯氧胺治療可能會(huì)減少絕經(jīng)后癥狀同時(shí)降低雌激素所導(dǎo)致的

3、腫瘤復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)。但目前的數(shù)據(jù)尚不足以確定這種方法可完全控制癥狀，尚須大樣本的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)以確認(rèn)其安全性。 中醫(yī)藥在長(zhǎng)期的臨床應(yīng)用中，被證明對(duì)圍絕經(jīng)期綜合征有較好的療效。二仙湯就是針對(duì)圍絕經(jīng)期綜合征在臨床上反復(fù)篩選驗(yàn)證，最終研制出的以補(bǔ)腎為主的方劑。二仙湯全方由仙茅、淫羊藿、巴戟天、當(dāng)歸、知母和黃柏組成，逐漸成為常用的治療更年期綜合征的代表方。其中仙茅、淫羊藿是二仙湯中的君藥，亦是臨床中治療圍絕經(jīng)期綜合征的常用藥物。但目前的研究對(duì)

4、于二仙湯及其君藥仙茅、淫羊藿對(duì)卵巢功能低下的作用機(jī)制尚未明了，對(duì)絕經(jīng)前后婦女及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性激素水平方面的調(diào)節(jié)，尤其是對(duì)血清E<,2>水平的影響，目前的研究結(jié)果尚不一致。由于其可能具有植物雌激素樣的作用，在體內(nèi)生物利用度的變化如何，對(duì)內(nèi)分泌系統(tǒng)及全身是否有潛在的副作用，在減輕絕經(jīng)相關(guān)癥狀的同時(shí)，對(duì)敏感人群是否會(huì)提高癌發(fā)生或促使癌轉(zhuǎn)移，與TAM合用是否可以拮抗其對(duì)乳腺癌細(xì)胞的刺激等均需進(jìn)一步研究。 故本研究的主要目的即是探討補(bǔ)腎中藥二

5、仙湯對(duì)乳腺癌化療性閉經(jīng)的作用，并通過對(duì)其君藥仙茅、淫羊藿單用或與三苯氧胺合用，作用于ERl(+)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞，了解其對(duì)乳腺癌細(xì)胞促增殖或凋亡的作用，以判斷其應(yīng)用于乳腺癌患者的安全性及有效性。 第一部分：二仙湯對(duì)乳腺癌化療性閉經(jīng)的作用 目的：探討中藥補(bǔ)腎法及健脾益氣法對(duì)乳腺癌化療性閉經(jīng)的影響。 方法: 本研究設(shè)計(jì)為回顧性臨床同期非隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)。共納入151例絕經(jīng)前患者，其中補(bǔ)腎法81例，健脾益氣法

6、70例。所有患者手術(shù)前均有正常月經(jīng)，而在手術(shù)后予以標(biāo)準(zhǔn)方案化療后出現(xiàn)閉經(jīng)。分別給予補(bǔ)腎為主的二仙湯及健脾益氣為主的四君子湯治療6月，隨訪2年。比較兩組患者服藥后月經(jīng)恢復(fù)情況及月經(jīng)復(fù)潮間隔時(shí)間(化療所致閉經(jīng)至恢復(fù)正常月經(jīng)周期間的間隔時(shí)間)，并以更年期綜合征癥狀評(píng)分表評(píng)價(jià)患者治療后更年期癥狀的變化情況。 結(jié)果: 補(bǔ)腎組中患者術(shù)后2年內(nèi)月經(jīng)復(fù)潮者比例為(50/81，61.7％)；而健脾組中患者月經(jīng)復(fù)潮比例為(39/70，55.

7、7％)。行COX回歸分析提示：乳腺癌患者化療后所致閉經(jīng)，影響其恢復(fù)正常月經(jīng)周期的主要因素有年齡、不同的中藥治療方法，以及化療方案。考慮年齡及不同化療方案的影響，接受二仙湯治療的患者月經(jīng)復(fù)潮的可能性為接受四君子湯治療的患者的2.46倍[95％CI：1.538，3.929]。兩組患者治療后月經(jīng)復(fù)潮時(shí)間的比較，并無明顯差異(p>0.05)。在改善潮熱、出汗、煩躁絕經(jīng)期癥狀方面，補(bǔ)腎組優(yōu)于健脾組(P<0.05)；而在減輕乏力、眩暈方面，健脾組效

8、果較補(bǔ)腎組為強(qiáng)p<0.05)。在改善憂郁、失眠及關(guān)節(jié)痛方面，二組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 結(jié)論: 與健脾益氣治法比較，二仙湯應(yīng)用于乳腺癌CIA患者，可以明顯改善患者潮熱、出汗、煩躁等絕經(jīng)期癥狀，但患者恢復(fù)正常月經(jīng)周期的可能性增加。由于相對(duì)于未進(jìn)行中藥治療的患者，亦可能有同樣的作用趨勢(shì)，進(jìn)一步的研究應(yīng)考慮行大樣本、多中心研究，通過設(shè)計(jì)良好的臨床隨機(jī)對(duì)照研究或隊(duì)列研究，并進(jìn)行長(zhǎng)期的隨訪，以進(jìn)一步明確二仙湯在乳腺癌C

9、IA患者間應(yīng)用的安全性及有效性。 第二部分：仙茅、淫羊藿對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖及凋亡的影響 目的：探討補(bǔ)腎中藥二仙湯中君藥仙茅、淫羊藿單用或與TAM合用是否有促人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖/凋亡的作用。 材料與方法: 雌激素依賴性人乳腺癌MCF-7細(xì)胞以含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，于實(shí)驗(yàn)加藥前4天改用無酚紅RPMI1640以洗脫細(xì)胞中殘留的雌激素。設(shè)立空白、E2及。TAM對(duì)照組，觀察

10、二仙湯中兩位君藥仙茅、淫羊藿顆粒劑及含藥血清單用及聯(lián)合TAM在不同劑量和作用時(shí)間下對(duì)MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。應(yīng)用MTT法觀察細(xì)胞增殖情況，應(yīng)用Annexin-V+PI雙染法及流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞凋亡情況。所有資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用方差分析。以P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)果: 仙茅、淫羊藿對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)的影響因濃度的不同而不同：不同濃度的仙茅顆粒劑及含藥血清對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7的促增殖作用均

11、不明顯(P>0.05)。10<'-6>mol/L濃度時(shí)的淫羊藿對(duì)MCF-7細(xì)胞有一定的促增殖作用(P<0.05)。但作用較E2為弱。仙茅、淫羊藿的濃度高于10<'-5>mol/L時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)受抑制(P<0.05)，且隨藥物濃度的增加細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率增大。而濃度低于10<'-7>mol/L，的淫羊藿對(duì)細(xì)胞促增殖作用不明顯(P>0.05)。不同濃度的仙茅、淫羊藿顆粒劑以及含藥血清與TAM合用均未見明顯的促細(xì)胞增殖作用(P>0.05)。高濃度的

12、仙茅顆粒劑及含藥血清對(duì)MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)有一定的抑制作用(P<0.05)，20％的淫羊藿含藥血清可以通過誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡而呈現(xiàn)抗乳腺癌的作用。20％的仙茅、淫羊藿含藥血清與TAM聯(lián)合使用可誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞的凋亡(P<0.05)，且隨劑量的增加，這種誘導(dǎo)作用也有所增強(qiáng)，表現(xiàn)出劑量-效應(yīng)關(guān)系。 結(jié)論: 仙茅、淫羊藿與TAM聯(lián)合作用于MCF-7細(xì)胞，無明顯促細(xì)胞增殖的作用，高劑量的淫羊藿含藥血清甚至有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用

13、。而中等劑量的淫羊藿顆?？赡苡腥醮萍に貥幼饔茫杀籘AM拮抗。提示仙茅、淫羊藿臨床上在一定劑量范圍內(nèi)使用是安全的，尤其對(duì)ER(+)乳腺癌患者合并TAM治療的情況下。從而為臨床應(yīng)用補(bǔ)腎中藥治療乳腺癌CIA提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。但其正確的使用方法，包括劑量、作用時(shí)間等仍需進(jìn)一步研究。 綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)對(duì)于乳腺癌CIA患者，二仙湯為主的補(bǔ)腎治療方法對(duì)于患者恢復(fù)正常月經(jīng)周期，改善絕經(jīng)期癥狀方面有一定的治療效果。而通過對(duì)其君藥仙茅、淫羊藿