1、目的：過量對乙酰氨基酚(APAP)可誘導細胞死亡誘導因子(AIF)依賴性肝細胞死亡,但作用機制還不清楚。本研究探討了在對乙酰氨基酚誘發(fā)小鼠急性肝損傷的過程中,程序性壞死關鍵調控因子受體相互作用蛋白激酶1(RIP1)在 AIF介導肝細胞死亡中的作用。
　　方法：(1)為探討GSH耗竭對APAP誘導肝臟RIP1和RIP3上調的影響,將小鼠統(tǒng)一禁食12 h后進行腹腔注射APAP(300 mg/kg),分別在不同的時點(0、1、2和4 h

2、)取材,檢測肝臟RIP1與RIP3的水平、GSH含量和腫瘤壞死因子(TNF-α)的mRNA水平。(2)為探討 RIP1選擇性抑制劑 Nec-1預處理和后處理對 APAP誘導急性肝損傷的影響,將小鼠隨機分為對照組、Nec-1組、APAP組和APAP+Nec-1組,在給予APAP前或后30 min腹腔注射Nec-1(0.125 mg/mouse),分別在4 h和24 h取材,檢測血清中 ALT的水平和肝細胞死亡情況。(3)為探討Nec-1對

3、APAP在肝臟代謝中的效應,將小鼠隨機分為對照組、Nec-1組、APAP組、APAP+Nec-1組,在給予APAP前30 min進行Nec-1預處理,30 min后取材,檢測肝臟的GSH含量和CYP2E1水平。(4)為探討Nec-1對APAP誘導肝臟JNK磷酸化、線粒體 Bax和細胞核 AIF的轉位的影響,將小鼠隨機分為對照組、Nec-1組、APAP組和APAP+Nec-1組,在給予APAP前30 min進行Nec-1預處理,4 h后進

4、行取材,檢測肝臟的JNK磷酸化水平、線粒體Bax水平和細胞核AIF的轉位情況。(5)為探討Nec-1是否通過其抗氧化活性來阻止APAP誘導的肝細胞死亡,將小鼠隨機分為對照組、APAP組、APAP+Nec-1組和APAP+Nec-1+BSO組,在給予APAP前30 min,APAP+Nec-1組進行Nec-1預處理,在給予Nec-1前進行BSO(25 mg/kg)預處理,4 h后進行取材,檢測血清中ALT的水平、肝臟的3-NT水平、GSH

5、含量、細胞核AIF的轉位和肝細胞死亡情況。
　　結果：RIP1選擇性抑制劑Nec-1可阻止APAP誘導的肝細胞死亡,能夠改善小鼠的生存率。肝細胞RIP1的水平在APAP處理1 h后顯著升高,且與肝細胞GSH耗竭相關。但是,Nec-1預處理并沒有影響在給予APAP30 min后肝臟的GSH水平,且 Nec-1預處理并沒有影響到早期肝臟 CYP2E1的表達。此外,Nec-1明顯抑制APAP誘導JNK激活,表明JNK是RIP1的下游靶點

6、。Nec-1可明顯抑制APAP誘導胞質Bax向線粒體轉位。同時,Nec-1完全阻斷APAP誘導的AIF從線粒體向細胞核轉位。在Nec-1對細胞內GSH水平的作用完全被BSO所取消后,Nec-1仍然能夠阻止APAP誘導的ALT水平的升高,仍明顯地阻止APAP誘導的細胞核AIF的轉位和肝細胞死亡。
　　結論：本研究結果表明肝臟 RIP1的激活是 APAP誘導小鼠急性肝衰竭的早期事件。RIP1選擇性抑制劑Nec-1預處理和后處理均對AP