1、Smurfl(Smad ubiquitination regulatory factor l)是HECT類泛素連接酶(E3) Nedd4家族中的成員之一，主要介導成骨細胞中BMP信號通路中蛋白分子的降解。Smurfl最早于1999年在尋找Smadl相互作用分子時被克隆，它是發(fā)現(xiàn)的第一個可以降解Smads的E3，這使得TGF—β/BMP通路與泛素．蛋白酶體降解通路聯(lián)系起來。除Smad外，近期研究表明生理條件下，Smurfl特異泛素化降解磷

2、酸化形式的MEKK2，從而負調控MEKK2—JNK—AP-1通路，抑制成骨細胞分化。酪蛋白激酶．2相互作用蛋白-1(casein kinase2 interacting protein-1，CKIP-1)是一個含PH結構域的質膜定位蛋白。2008年本實驗室發(fā)表在Nature Cell Biology的文章揭示CKIP-1是Smurfl E3活性的增強分子。Smurfl的兩個WW結構域結合底物，而中間的連接區(qū)結合CKIP-1，因此CKIP

3、-1、Smurfl、底物(如Smad1/5)之間就形成了“調控分子—E3—底物”三元復合物，CKIP-1增強Smurfl與底物的親和力，加速底物泛素化。這是首次發(fā)現(xiàn)Smurfl的調控分子。 TRAF(TNF receptor associated factor)家族分子作為胞內接頭蛋白，能介導TNF受體、Toll樣受體和IL-1受體超家族成員與多種下游信號通路包括NF—KB和JNK通路的信號轉導，進而參與骨代謝、先天性和獲得性

4、免疫、胚胎發(fā)育、應激響應等多種生物學過程。與TRAFs結合的蛋白都含有一個或多個TRAF相互作用模序(TRAF—interacting motif， TIM)。CKIP-1中含有多個TIM模序，本文用免疫共沉淀技術證明了TRAFs與CKIP-1間的相互作用，其中TRAF1、TRAF4與CKIP-1結合較強，隨后確定了TRAFs與CKIP-1結合的區(qū)域為C—TRAF結構域。通過報告基因實驗表明，過表達CKIP-1可以上調NF—kB的轉錄活

5、性。 在研究TRAFs與CKIP-1相互作用的同時，本實驗室利用酵母雙雜交技術，以Smurfl介導底物結合的WW結構域(236—340aa)為誘餌蛋白，從成人腦文庫中篩選到TRAF4(1—363aa)為候選相互作用蛋白。進而我們利用免疫共沉淀及GST pull—down技術，證明Smurfl與TRAF4可直接相互作用，這種相互作用是由Smurfl的WW2結構域及TRAF4的PY模序介導的。蛋白水平分析及體內泛素化實驗表明，TRA

6、F4是Smurfl的一個新的底物，且CKIP-1可以促進Smurfl對TRAF4的泛素化降解。隨后的報告基因實驗，也在NF-1B轉錄活性上進一步印證了Smurfl對TRAF4的依賴蛋白酶體的泛素化降解作用。綜上結論，TRAF4與Smurfl、CKIP-1結合，符合CKIP-1促進Smurfl泛素化并依賴蛋白酶體降解底物的規(guī)律，進一步揭示了CKIP-1對Smurfl的E3調控具有普適性。目前關于CKIP-1、Smurfl在免疫信號通路中的