1、第一部分高血脂對阿霉素腎病大鼠腎損傷程度影響的實驗研究 目的：比較高脂和普通飼料飼養(yǎng)阿霉素腎病大鼠對腎臟病變程度的影響，探討炎癥與脂代謝紊亂在腎損害中的相互作用。 方法：雄性Wistar大鼠49只(10～11周齡、體重240～275g)，隨機分為四組：正常對照組(N)、高脂飼養(yǎng)組(HF)、阿霉素腎病組(ADR)、阿霉素+高脂飼養(yǎng)組(ADR+HF)。N組予普通飼料喂養(yǎng)，并于實驗開始尾靜脈注射生理鹽水對照；HF組飼予高脂飼料

2、(高脂飼料配方：基礎飼料+10％豬油+4％膽固醇+1％膽酸鈉)，于實驗開始尾靜脈注射生理鹽水對照；ADR組飼普通飼料，于實驗開始尾靜脈注射阿霉素6mg/kg；ADR+HF組于實驗開始尾靜脈注射同劑量阿霉素并飼高脂飼料。實驗周期為12周，分別于0、4、8、12周檢測24h尿蛋白含量，分別于第8周，12周時，麻醉下摘眼球取血并處死大鼠，檢測血清TP、ALB、TG、TC、HDL、LDL、BUN、Scr水平；腎組織行HE，PAS病理檢查，冰凍切

3、片行蘇丹Ⅲ染色觀察腎臟脂質沉積情況；電鏡下觀察腎臟超微結構。 結果：(1)生化指標：①24小時尿蛋白定量：HF組實驗第4、8、12周尿蛋白均較N組有所升高，但無顯著性差異(P>0.05)；ADR組和ADR+HF組從第4周起尿蛋白定量均較N組、HF組明顯升高(P<0.05)，并呈時間依賴性；ADR+HF組在第8、12周明顯高于ADR組(P<0.05)。②血清白蛋白、總蛋白含量：第8周HF組與N組無差異，第12周ALB較N組降低(P

4、<0.05)，TP與N組無差別；ADR組和ADR+HF組，TP及ALB在第8、12周均低于N組(P<0.05)，且以ADR+HF組降低尤甚，低于ADR組(P<0.05)。③血清脂質含量：血清TG：HF組與N組無差別；ADR組及ADR+HF組較N組、HF組明顯升高(P<0.05)，其中ADR+HF組升高尤為明顯，高于ADR組(P<0.05)；血清TC、LDL：8周起各組均較N組升高(P<0.05)，ADR組及ADR+HF組高于HF組(P<

5、0.05)，且ADR+HF組較ADR組升高(P<0.05)；血清HDL：8周時，ADR組高于N組及HF組(P<0.05)；12周時，ADR組及ADR+HF組較N組及HF組升高(P<0.05)。④腎功能指標：8周，12周時各組血清BUN、Scr水平差異均無顯著性。(2)病理檢查：①HE染色：8周時HF組腎小球及小管病變輕微，腎小球及間質無炎癥細胞浸潤；ADR組腎小球細胞數(shù)增多，管腔內蛋白管型，腎間質炎癥細胞浸潤；ADR+HF組腎小球體積增

6、大，腎小球少量炎癥細胞浸潤及泡沫細胞形成，間質炎癥細胞浸潤明顯。12周時HF組腎小球體積明顯增大，小管上皮細胞明顯濁腫；ADR組腎小球增大，球囊粘連，腎小球內及問質炎癥細胞浸潤，數(shù)量較8周時增加，小管上皮細胞明顯濁腫，大量蛋白管型；ADR+HF組腎小球內及間質炎癥細胞浸潤明顯增多，并有泡沫細胞形成，腎小球蒂部也有較多炎癥細胞浸潤，大量蛋白管型。②：PAS染色：8周時HF組系膜基質輕度增寬；ADR組腎小球系膜細胞增生，系膜基質增寬，基底膜

7、局灶增厚；ADR+HF組病變與ADR組類似，程度稍重。12周時HF組系膜基質增寬程度加重：ADR組系膜基質明顯增寬，基底膜明顯增厚；ADR+HF組系膜細胞大量增生，系膜基質明顯增寬，基底膜廣泛增厚，其病變程度較ADR組加重，并可見FSGS改變。③蘇丹Ⅲ脂肪染色：8周時HF組腎小管可見少量脂肪沉積；ADR組腎小球及腎小管均有脂肪沉積；ADR+HF組腎小球、腎小管脂肪沉積明顯，程度較其余組重。12周時HF組脂肪沉積以腎小管為主，腎小球僅有少

8、量沉積；ADR組及ADR+HF組腎臟脂肪沉積明顯較8周時加重，且ADR+HF組脂肪沉積廣泛、嚴重。④電鏡下觀察情況：8周時HF組足突輕度融合，系膜細胞輕度增生，腎小管上皮細胞內少量脂滴沉積；ADR組系膜輕度增生，足突融合，基底膜局灶性增厚，腎小管上皮細胞內脂滴沉積；ADR+HF組足突完全融合，基底膜明顯增厚，系膜區(qū)增寬。12周時HF組足突局灶融合，小管上皮細胞內脂滴沉積，病變較8周時加重；ADR組系膜增生明顯，足突廣泛融合，基底膜明顯增

9、厚，腎小管上皮細胞水腫，脂滴沉積；ADR+HF組足突消失，基底膜嚴重增厚，結構不清，系膜大量增生，腎小管水腫、變性，脂滴沉積。 結論：高膽固醇血癥可引起腎臟炎癥細胞浸潤及足細胞損傷，小管間質損傷較輕；阿霉素腎病小球、小管均有損傷，但在腎臟發(fā)生炎癥病變并伴有高膽固醇血癥時，腎臟受損程度明顯重于僅有高脂血癥或單純腎臟炎癥所致的腎損害，提示腎組織中炎癥因子和脂質的相互作用加重了腎臟損害。 第二部分阿霉素腎病大鼠腎組織中炎癥因子

10、對LDLr表達影響的研究。 目的：觀察阿霉素腎病大鼠腎組織中炎癥因子TNF-α對低密度脂蛋白受體(LDLr)表達的影響，探討炎癥介質與脂質在腎損害中的作用以及脂質腎損害的發(fā)病機理。 方法：采用第一部分實驗各組大鼠血清及腎臟組織標本；ELISA方法檢測血清TNF-α含量，免疫組織化學、Western印跡檢測腎組織TNF-α、LDLr蛋白表達，RT-PCR檢測腎組織LDLr mRNA的表達。 結果：①TNF-a表達情

11、況：實驗第8周和12周，HF組血清TNF-α水平與N組無差別，但免疫組化及Western blotting法顯示第8周時HF組腎組織中的TNF-α表達已開始升高，與N組比較差異有顯著性(P<0.05)。ADR組及ADR+HF組TNF-α血清水平及腎組織中蛋白含量在第8周較N組及HF組升高(P<0.05)，升高程度呈時間依賴性，且ADR+HF組血清及腎組織中TNF-α水平均較ADR組明顯升高(P<0.05)。②腎組織LDLr蛋白和mRNA

12、表達從8周起各組均較N組增加(P<0.05)，ADR組升高程度較Ⅲ組明顯(P<0.05)，ADR+HF組升高尤為顯著，兩個時間點與HF組，ADR組比較均有差別(P<0.05)，其表達量的增高呈時間依賴性。 結論：腎組織LDLr的表達不僅受到局部脂質水平影響，同時也受炎癥因子的調節(jié)。炎癥因子可通過刺激腎實質細胞過多表達LDLr影響局部膽固醇代謝反饋調節(jié)機制，導致脂質沉積，這為炎癥介導脂質腎損害的觀點提供了一定的實驗依據(jù)。反之，組織