1、疼痛是中晚期癌癥患者的常見癥狀，由于常規(guī)止痛藥物療效不甚明顯，給患者帶來了極大的生理心理傷害。因此，對于癌癥患者的疼痛機制研究及探索新的鎮(zhèn)痛方法是目前醫(yī)務工作者面臨的重要任務。臨床三大腫瘤肺癌、乳腺癌、前列腺癌均易發(fā)生骨轉移，且骨腫瘤患者的疼痛發(fā)生幾率及嚴重程度均較其他患者顯著增高，因此從骨腫瘤入手研究癌癥性疼痛具有更好的臨床意義。利用 Walker256腫瘤細胞株來建立骨癌痛模型的技術目前已經較為成熟，可模擬臨床癌痛狀態(tài)，且致瘤性良好

2、，模型成功率高，具有較好的研究價值。
　　P2X嘌呤受體在疼痛發(fā)生發(fā)展中的作用已經被諸多研究證實，尤其是P2X3亞單位高度選擇性的表達于小直徑的感覺神經元，與痛覺信號傳遞密切相關。ATP導致的DRG細胞內鈣離子濃度變化已經被用于表示傷害感受性刺激的反應，初級DRG神經細胞培養(yǎng)是調查神經生理和傷害性信號的有用模型體系。ATP敏感的P2X3受體在疼痛系統(tǒng)中扮演重要角色，觸發(fā)“疼痛信號”。一旦ATP被釋放進入細胞內，DRG初級傳入神經纖

3、維及其胞體上的P2X3受體就被激動，進而導致電壓門控鈣離子通道開放，鈣離子內流導致細胞去極化，已知周圍神經末梢去極化會導致疼痛感。在癌痛患者中，其介導疼痛發(fā)生的P2X3受體的功能及數量均得到了一定程度的上調，是何種分子導致了其上調目前尚無明確結論。
　　溶血磷脂酸(Lysophosphatidic Acid，LPA)是具有生長因子樣作用的脂類小分子物質，在體內主要由被激活的血小板產生，已知的 LPA受體有6種類型，研究較多的是LP

4、Al、LPA2和LPA3三種受體。LPA是一種G蛋白偶聯受體，其胞內信號傳導機制主要分為四種：磷酸肌醇通路、抑制cAMP通路、激活Ras-MAPK通路、激活Rho通路。已經有專家研究發(fā)現癌癥患者的血液溶血磷脂酸（LPA）濃度明顯高于正?；颊撸沟肔PA成為疼痛調節(jié)機制研究的新熱點。
　　為了進一步研究溶血磷脂酸對P2X3受體介導的骨癌痛作用及機制，本研究分三個步驟(1)建立大鼠脛骨癌痛模型并觀察其疼痛閾值變化；（2）觀察免疫熒光檢

5、測中DRG神經元上LPA1與P2X3受體的表達情況；（3）應用熒光鈣離子成像技術觀察 LPA對脛骨癌痛大鼠 DRG神經元上P2X3受體通道的調控作用及可能的細胞內信號途徑。主要研究結果如下：
　　1．模型建立情況
　　雌性 Wistar大鼠脛骨骨髓腔內接種 Walker256腫瘤細胞后14-21天，使用von frey纖維絲檢測大鼠患肢足底6個位點的機械痛閾值，較術前有明顯降低，且明顯的間歇性抬腿、跛行等自發(fā)性疼痛行為。以上

6、結果表明大鼠骨癌痛模型成功建立，模型主要行為學特征為機械性痛覺過敏和自發(fā)性運動疼痛。
　　2.脛骨癌痛大鼠DRG中LPA1及P2X3受體的表達量升高
　　在DRG組織切片和急性分離的DRG神經元上用免疫熒光方法顯示P2X3受體的表達量明顯增高，且 LPA1和P2X3受體共表達于DRG神經元，為LPA對P2X3受體的調控作用提供形態(tài)學基礎。
　　3.在急性分離的脛骨癌痛模型大鼠DRG神經元上，應用 Ca2+成像技術觀察L

7、PA對P2X3受體通道的調控作用及可能的信號通路。
　　LPA可以增強P2X3受體激動后導致的DRG細胞內Ca2+內流效應，且LPA1阻斷劑VPC32183可以有效阻斷這種效應；Rho信號通路阻斷劑胞外酶C3可以部分阻斷LPA對于P2X3受體的增強效應。以上結果說明LPA可以調控P2X3受體通道的功能，其機制可能與Rho信號通路有關。
　　綜上所述，大鼠脛骨癌痛模型成功建立后，DRG神經元上 P2X3受體的表達上調，在LPA