1、本文主要從以下兩方面進行論述：
　　第一部分 在脂多糖誘導的血腦屏障破壞中p38MAPK、JNK信號通路的作用機制研究
　　目的:探討p38MAPK和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信號通路在脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導血腦屏障(blood-brain barrier， BBB)的破壞中的作用。
　　方法:1.培養(yǎng)人腦微血管內皮細胞(human cerebral microvascular

2、 endothelial cells，hCMEC/D3)，用不同濃度的LPS、p38MAPK和JNK信號通路抑制劑（分別為SB203580、SP600125）分別刺激細胞24h，用四甲基偶氮唑鹽(MTT法)檢測其對細胞活力的影響。
　　2.用不同濃度的LPS刺激細胞，蛋白免疫印跡法(Western blot法)檢測緊密連接蛋白Occludin、ZO-1的變化。
　　3.用LPS刺激細胞不同的時間后，用蛋白免疫印跡法檢測p38

3、MAPK及JNK信號通路磷酸化水平的變化。
　　4.用SB203580、 SP600125預處理細胞1h后，再加入LPS共培養(yǎng)24h，分別用Western blot法及熒光定量PCR法(RT-PCR)檢測緊密連接Occludin、ZO-1蛋白及其mRNA表達的變化。
　　結果:1.LPS、SB203580和SP600125濃度分別在10μg/ml、7.69μg/ml和0.22μg/ml以下時對hCMEC/D3細胞活力無明顯影

4、響。
　　2.LPS刺激細胞可誘導緊密連接Occludin、ZO-1蛋白及其mRNA的表達水平顯著下調，Western blot法進一步證實LPS刺激細胞后p38MAPK和JNK信號通路分子的磷酸化顯著增加。
　　3.SB203580或SP600125預處理細胞1h，可以顯著上調LPS誘導的Occludin蛋白及其mRNA的表達水平，但對LPS誘導的ZO-1蛋白及mRNA表達的影響無統(tǒng)計學意義。
　　結論:LPS可誘導

5、緊密連接Occludin、ZO-1蛋白及其mRNA的下調導致BBB破壞;LPS可能通過激活p38MAPK和JNK信號通路磷酸化，從而調節(jié)hCMEC/D3細胞緊密連接Occludin蛋白及其mRNA的表達;然而LPS對ZO-1蛋白及其mRNA表達的影響可能通過其他信號通路實現。
　　第二部分 在脂多糖誘導的血腦屏障破壞中基質金屬蛋白酶的作用及其信號通路機制的研究
　　目的:探討基質金屬蛋白酶-2和-9（MMP-2和MMP-9）

6、在LPS誘導BBB破壞中的作用及其信號通路機制。
　　方法:1.培養(yǎng)hCMEC/D3，用p38MAPK和JNK信號通路抑制劑預處理細胞1h，再與LPS共培養(yǎng)24h，分別用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和RT-PCR法分別檢測MMP-2活性和MMP-9 mRNA表達的變化。
　　2.用MMPs總抑制劑、MMP-2及MMP-9抑制劑（分別為Doxycyclinehyclme、SB-3CT13.9 nmol/l及SB-3CT600

7、nmol/L）分別預處理細胞1h后，再與LPS共培養(yǎng)，Western blot法檢測Occludin蛋白表達的變化。
　　結果:1.LPS刺激細胞后可觀察到MMP-2活性和MMP-9 mRNA的過度表達，p38MAPK和JNK信號通路抑制劑預處理后可顯著下調LPS的誘導作用。
　　2.LPS刺激細胞后緊密連接Occludin表達顯著下降，MMPs總抑制劑、MMP-2及MMP-9抑制劑預處理后可明顯逆轉LPS誘導的緊密連接Oc