1、變應(yīng)性哮喘是以IgE過(guò)量合成、嗜酸性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞浸潤(rùn)、氣道高反應(yīng)性及氣道重塑為主要特征的慢性氣道炎癥。哮喘發(fā)病率逐年上升，嚴(yán)重影響患者日常生活，有時(shí)甚至是致命的。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，變應(yīng)性哮喘是一種Th1/Th2反應(yīng)失衡的呼吸道疾病，哮喘病程中，Th2反應(yīng)占主導(dǎo)作用，產(chǎn)生Th2類細(xì)胞因子從而阻抗Th1反應(yīng)，介導(dǎo)了嗜酸性粒細(xì)胞炎癥及B細(xì)胞分泌IgE過(guò)程，調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡調(diào)控哮喘已成為公認(rèn)的治療方法。
　　 百日咳桿菌為一類致

2、病微生物，可誘發(fā)百日咳疾病。近年來(lái)醫(yī)學(xué)工作者將滅活百日咳桿菌疫苗，白喉疫苗及破傷風(fēng)疫苗合用形成百白破聯(lián)用疫苗，以預(yù)防這三類疾病。也有研究發(fā)現(xiàn)滅活百日咳桿菌為一種Th1反應(yīng)刺激劑，可產(chǎn)生防治變應(yīng)性疾病作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)滅活全細(xì)胞百日咳桿菌對(duì)小鼠變應(yīng)性哮喘具有治療作用，這可能與其中包含抗變應(yīng)性哮喘活性的CpG-ODNs有關(guān)。
　　 非甲基化含CpG基序寡核苷酸單鏈(unmethylated CpG motif containing

3、oligo deoxy nucleotides，簡(jiǎn)稱CpG-ODNs)為一類具有抗變應(yīng)性疾病活性的DNA序列。目前研究發(fā)現(xiàn)4種亞型，即A型-D型。脊椎動(dòng)物含有無(wú)活性的甲基化CpG-ODNs，無(wú)脊椎動(dòng)物含有有活性的非甲基化CpG-ODNs。CpG-ODNs進(jìn)入機(jī)體后，以胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞，與細(xì)胞內(nèi)體中TOLL樣受體-9(TLR-9)結(jié)合，激活TLR共刺激通路，誘導(dǎo)核因子(AP-1，NF-kappaB)轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)Th1細(xì)胞因子合成，抑制Th2

4、型細(xì)胞因子分泌，使哮喘中失衡的Th1/Th2反應(yīng)恢復(fù)平衡，產(chǎn)生調(diào)節(jié)變應(yīng)性哮喘作用。
　　 前期研究主要涉及給予變應(yīng)性哮喘小鼠滅活百日咳桿菌，對(duì)其調(diào)節(jié)變應(yīng)性哮喘機(jī)制進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)給藥后哮喘小鼠BALF中炎癥細(xì)胞數(shù)下降，且外周血中IL-4/IFN-γ恢復(fù)平衡，具有一定調(diào)節(jié)變應(yīng)性哮喘機(jī)制的作用，這種作用可能由菌體內(nèi)的CpG-ODNs產(chǎn)生，但對(duì)百日咳桿菌CpG-ODNs防治哮喘的機(jī)制研究未見(jiàn)報(bào)道。本研究基于前期研究，應(yīng)用軟件獲取9條

5、百日咳桿菌CpG-ODNs，進(jìn)行抑制炎癥細(xì)胞反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，篩選出抑制炎癥細(xì)胞最佳CpG-ODNs序列seq A。后續(xù)研究中應(yīng)用seqA給予OVA致敏小鼠慢性哮喘模型，檢測(cè)其對(duì)變應(yīng)性哮喘小鼠肺泡灌洗液(BALF)中Th1/Th2細(xì)胞因子(IFN-γ/IL-4)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)產(chǎn)生量的影響，并通過(guò)RT-PCR和western blot法分別檢測(cè)小鼠脾細(xì)胞TLR-9 mRNA及肺組織TLR-9蛋白表達(dá)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，seq A抑制炎癥

6、細(xì)胞效果最佳，其能夠提高小鼠慢性哮喘模型BALF中IFN-γ含量，抑制IL-4含量；但對(duì)VEGF作用并不明顯。且其能夠有效上調(diào)小鼠脾細(xì)胞TLR-9 mRNA和肺組織TLR-9蛋白表達(dá)量，所有實(shí)驗(yàn)組中腹腔注射(ip)組均優(yōu)于灌胃(ig)組。結(jié)果表明，百日咳桿菌CpG-ODNs具有抑制炎癥細(xì)胞活性，seq A能夠有效調(diào)節(jié)Th1/Th2反應(yīng)，且其對(duì)TLR-9具有上調(diào)作用，證明這種活性與激活TLR-9信號(hào)通路有關(guān)，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)給予CpG-ODNs時(shí)