1、目的:觀察色素上皮衍生因子(PEDF)對腎小球系膜細胞MCP-1、IL-6mRNA及蛋白表達的影響,并探討其可能的作用機制。
　　方法:以不同濃度葡萄糖(10、20、30mmol/L)及不同時間(12h、24h、48h)作用腎小球系膜細胞,聚合酶鏈式反應(RT-PCR)方法檢測MCP-1、IL-6mRNA表達;加入不同濃度PEDF(10、40、160nmol/L)干預,RT-PCR和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法分別檢測MCP

2、-1、IL-6mRNA和蛋白表達,觀察PEDF對上述炎癥因子表達的影響;細胞免疫熒光方法檢測NF-κBp65蛋白表達。
　　結果:(1)5.6mmol/L糖可使系膜細胞中有基礎量的MCP-1、IL-6mRNA的表達,高糖作用后,二者的表達水平隨糖濃度升高而增高,20mmol/L濃度時達高峰(P<0.01)。當糖濃度繼續(xù)增加至30mmol/L時,MCP-1mRNA表達不再隨糖濃度增加而增加,IL-6mRNA表達則出現(xiàn)下降(P<0.0

3、5)。在20mmol/L高糖作用12~48h范圍內(nèi),二者表達水平隨作用時間延長而增加,呈明顯的時效關系。(2)PEDF可下調(diào)MCP-1、IL-6mRNA及蛋白表達,并且呈量效關系。當濃度增加至160nmol/L時,PEDF幾乎完全阻斷了高糖對MCP-1、IL-6的誘導作用。(3)高糖作用下NF-κB熒光信號從胞漿轉移到胞核,PEDF阻斷了NF-κB信號的核轉位。
　　結論:(1)高糖可促使腎小球系膜細胞MCP-1、IL-6mRNA